WB 및 ELISA용 항-APAF1 토끼 단일클론 항체 - O14727

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: APAF1의 기능 및 위치

• APAF1(Apoptotic protease-activating factor 1, CED4 또는 APAF-1이라고도 함)은 APAF1 유전자(KIAA0413)에 의해 암호화되며, 대체 스플라이싱으로 인해 여러 동형 단백질(isoform)로 존재합니다.
• 이 단백질은 아포토좀(apoptosome)의 핵심 구성 요소로 기능하며, 올리고머 형태의 APAF1은 시토크롬 c 의존적 pro-caspase-9의 자가 단백질 분해 활성화를 매개하고, 이후 caspase-3를 활성화하여 세포 사멸을 실행합니다. 이 과정에는 ATP 결합이 필요합니다.
• APAF1은 N-말단 caspase 모집 도메인(CARD), 중앙 뉴클레오타이드 결합 및 올리고머화 도메인(NOD), 그리고 시토크롬 c 결합에 중요한 C-말단 WD40 반복 영역을 포함하는 다중 도메인 단백질입니다.
• 세포 내 위치 측면에서, APAF1은 정상 상태에서는 주로 세포질에 존재하며, 세포 사멸이 유도되면 아포토좀 복합체로 이동합니다.
• 발현은 어디에서나 나타나며, 성인의 비장, 말초 혈액 백혈구, 태아 뇌, 신장 및 폐에서 가장 높은 수준으로 검출됩니다. 동형 단백질 1은 특히 심장, 신장 및 간에서 발견됩니다.
• 이 단백질은 ATP/dATP 결합 및 칼슘 매개 조절의 영향을 받으며, 단백질-단백질 상호작용에 필수적인 WD 반복 서열을 특징으로 합니다.
• 키워드: 3D 구조, 대체 스플라이싱, 세포 사멸(Apoptosis), ATP 결합, 칼슘, 세포질, 직접 단백질 서열 분석, 뉴클레오타이드 결합, 단백질체학 식별, 참조 단백질체, 반복, WD 반복.

실험 지침 및 기술 팁

• 면역원은 인간 APAF1(중앙 NOD 영역)의 아미노산 470-600에 해당하므로 전장 및 절단 변이체의 검출을 보장하지만, 관련 세포 모델에서 특이성을 확인해야 합니다.
• 웨스턴 블로팅(Western blotting)의 경우, 동형 단백질 다양성과 caspase 절단으로 인해 APAF1이 여러 분자량(38-142 kDa)으로 이동한다는 점을 고려하십시오. 밴드 패턴은 세포 유형 및 세포 사멸 자극에 따라 다를 수 있습니다.
• ELISA 응용 분야는 재조합 APAF1 표준 곡선을 사용하여 개발할 수 있습니다. 분석 특이성을 검증하기 위해 적절한 양성(예: 스타우로스포린 처리된 Jurkat 용해물) 및 음성 대조군을 포함하십시오.
• 서열 상동성에 따라 마우스 APAF1과의 교차 반응성이 예상되지만, 마우스 조직이나 세포주에서의 경험적 확인을 권장합니다.
• 각 실험 시스템에 대해 항체 희석, 배양 조건 및 검출 시약의 최적화를 권장합니다.

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