WB, IF/ICC, ELISA용 Anti-ATG12 다클론 항체 - O94817

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: ATG12 기능 및 국소화

• 유비퀴틴 유사 단백질인 ATG12 (APG12-like라고도 함)은 오토파지 경로의 핵심 구성 요소로, 오토파고솜(autophagosome) 형성에 필수적입니다.
• ATG12는 ATG7 (E1-like) 및 ATG10 (E2-like)이 관여하는 유비퀴틴 유사 시스템을 통해 ATG5와 결합합니다. ATG12-ATG5 결합체는 E3-like 효소로 작용하여 ATG8 패밀리 단백질의 지질화(lipidation) 및 막 결합을 촉진합니다.
• ATG12-ATG5 복합체는 ATG16L1과 함께 스트레스를 받은 리소좀으로 LRRK2를 모집하고, 리소좀 스트레스에 대한 반응으로 LRRK2 키나제 활성을 유도하는 데 필요합니다 (유사성에 의함).
• 세포 내에서 ATG12는 세포질 및 오토파고솜 전구 구조 막(preautophagosomal structure membrane)에 국재하며, 이는 초기 오토파지 단계에서의 역할과 일치합니다.
• ATG12는 사람 조직 전반에 걸쳐 발현되며, 이는 세포 항상성(cellular homeostasis)에서의 기본적인 역할을 반영합니다.
• 번역 후 변형으로는 아세틸화와 ATG5와의 이소펩타이드 결합 형성이 포함됩니다. 대안 스플라이싱(alternative splicing)은 여러 이소폼을 생성하며, 3D 구조가 밝혀졌습니다 (단백질체학 식별; 참조 단백질체; Ubl 결합 경로).
• 바이러스 감염 시 ATG12는 친바이러스 인자(proviral factor)로 작용합니다: ATG5-ATG12 결합체는 VSV 감염 시 I형 인터페론(IFN) 생성을 손상시켜 선천성 항바이러스 면역 반응을 음성 조절합니다. 또한 이는 유입 HCV RNA의 번역 및 복제 시작에 필요하지만, 이미 확립된 감염에는 필요하지 않습니다. 관련 참고문헌: PMID:17709747 PMID:19666601

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원은 사람 ATG12의 N-말단 영역 (aa 1–100)에서 유래한 합성 펩타이드입니다. 샘플 유형에서 에피토프 접근성을 확인하는 것을 고려하십시오. WB의 경우 표준 항원 회복은 필요하지 않을 수 있습니다.
• 웨스턴 블로팅에서 단량체 ATG12에 대해 ~15 kDa 밴드가 예상됩니다. ATG12-ATG5 결합체는 비환원 조건에서 더 높은 분자량으로 나타날 수 있습니다. 형태를 구별하기 위해 적절한 대조군을 포함하십시오.
• 면역형광/ICC의 경우 예상되는 염색 패턴은 세포질 및 점상(punctate, 오토파고솜 전구 구조)입니다. 오토파지 마커(예: LC3)와 이중 염색을 수행하면 특이성 확인에 도움이 될 수 있습니다.
• 이 다클론 항체는 마우스 및 쥐 ATG12와 교차 반응하므로, 종 간 연구에 적합합니다. 관련 종 배경에서 항상 검증을 수행하십시오.
• 모든 다클론 항체와 마찬가지로, 로트 간 변동성이 발생할 수 있습니다. 모든 실험에 양성 및 음성 대조군을 포함하고 최적의 신호 대 잡음비를 위해 적정(titration)을 고려하십시오.

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