WB, IF/ICC, ELISA용 항-CAD 토끼 단클론 항체 - P27708

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: CAD 기능과 위치

• CAD는 데 노보 피리미딘 생합성 경로의 처음 세 가지 활성인 카바모일인산 합성효소(CPSase), 아스파르트산 트랜스카바밀라제(ATCase), 디히드로오로타제(DHOase)를 코딩하는 큰 다기능 효소입니다.
• CPSase 활성에는 글루타민 의존성 아미드전이효소(GATase) 도메인이 관여하여 암모니아를 생성하고, 이후 합성효소 도메인이 암모니아를 이용해 ATP와 중탄산염으로부터 카바모일인산을 생산합니다.
• 생성된 카바모일인산은 ATCase 활성 부위로 전달되어, L-아스파르트산으로부터 카바모일-L-아스파르트산 생성을 촉매합니다.
• 마지막으로 DHOase 도메인이 카바모일아스파르트산을 고리화하여 UMP 합성의 전구체인 디히드로오로테이트를 형성합니다.
• CAD는 세포질과 핵 모두에 위치합니다.
• CAD의 번역 후 변형에는 아세틸화와 인산화가 포함되며, 이는 CAD의 활성과 경로 플럭스를 조절합니다.
• CAD 유전자의 돌연변이는 선천성 당화장애(CDG1Z) 및 발달성 간질 뇌병증(DEE50, EIEE50)과 관련이 있습니다.
• 이 단백질의 분자량은 약 243 kDa이며, ATP, 금속 이온(마그네슘, 망가니즈, 아연) 및 뉴클레오티드에 대한 결합 부위를 가진 여러 도메인을 포함합니다.

실험 가이드 및 기술 팁

• 면역원은 인간 CAD의 N-말단 영역(아미노산 1~100)에 상응하는 합성 펩티드로, GATase 도메인을 표적으로 할 가능성이 높습니다. 관련 세포 모델에서 특이성을 검증하십시오.
• 243 kDa 단백질의 웨스턴 블롯 검출 시, 효율적인 전사를 위해 저농도(예: 6~8%) 폴리아크릴아미드 겔을 사용하고 전사 시간을 연장하십시오.
• IF/ICC에서는 세포질과 핵 풀 모두를 검출하기 위해 4% PFA 고정과 0.1% Triton X-100 투과화를 고려하십시오.
• ELISA에서는 이 항체를 직접 또는 샌드위치 형식에 적용할 수 있으며, 양성 대조군으로 면역원 펩티드를 포함하십시오.
• 내인성 CAD 발현은 세포 유형에 따라 다르므로 HeLa나 HEK293 세포와 같은 실험 시스템에서 항체를 검증하십시오.
• 인간 외 종에 대한 교차 반응성은 아직 확인되지 않았으므로, 비인간 샘플을 테스트하는 경우 서열 정렬을 수행하십시오.

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