WB, ELISA용 Anti-Cas9 토끼 단일클론 항체 - Q99ZW2

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: Cas9 기능 및 국소화

• Cas9 (CRISPR-associated endonuclease Cas9/Csn1)는 Streptococcus pyogenes의 II형 CRISPR-Cas 적응 면역계에서 효과인자(effector) 단백질로 작용하는 RNA 유도 DNA 엔도뉴클레아제입니다.
  관련 참고문헌: PMID:21455174
• CRISPR 간섭 경로에서 Cas9는 CRISPR RNA (crRNA) 및 trans-activating crRNA (tracrRNA)와 복합체를 형성합니다. 이 이중 RNA 유도 복합체는 crRNA 스페이서 서열과 상보적인 이중 가닥 DNA 표적을 인식하고 절단합니다.
• 표적 인식 및 절단에는 표적 부위 바로 하류에 짧은 protospacer adjacent motif (PAM) 서열 (SpCas9의 경우 5’-NGG-3’)이 필요합니다. PAM 인식은 촉매 활성에 필수적이며 자기(self)와 비자기(non-self) DNA를 구별하는 데 도움을 줍니다.
  관련 참고문헌: PMID:24476820
• DNA 절단 외에도 Cas9는 crRNA의 성숙에도 참여합니다. tracrRNA 및 숙주 리보뉴클레아제 III와 함께 올바른 가공을 위해 pre-crRNA:tracrRNA 이중나선을 안정화하지만, Cas9 자체는 RNA 절단에서 촉매적 역할을 하지 않습니다.
  관련 참고문헌: PMID:24270795
• Cas9는 DNA 결합, 엔도뉴클레아제 및 엑소뉴클레아제 활성을 지닌 다중 도메인 단백질입니다. 핵분해 활동은 마그네슘 또는 망간과 같은 2가 금속 이온에 의존합니다.
• 고해상도로 구조가 규명된 Cas9는 RNA 결합, DNA 풀림(unwinding), 및 두 뉴클레아제 도메인(RuvC 및 HNH)에 의한 조화된 절단 역할을 가능하게 하는 입체적 유연성을 나타냅니다.
• Cas9의 고유 분자량은 약 158 kDa이며, 이는 거대한 다중 도메인 구조와 일치합니다.

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원은 Streptococcus pyogenes Cas9의 아미노산 450~730으로 구성되며, 여기에는 RuvC 뉴클레아제 도메인의 일부가 포함됩니다. 이 항체는 천연 및 변성 Cas9 단백질을 모두 인식할 수 있음을 고려하십시오.
• 웨스턴 블로팅(Western blotting)의 경우, 전장(full-length) Cas9의 예측 분자량은 ~158 kDa입니다. 관련 샘플 시스템(예: S. pyogenes 용해물 또는 SpCas9를 발현하는 조작된 세포주)에서 반응성을 검증하십시오.
• ELISA를 개발할 때, 재조합 Cas9 단백질 또는 세포 추출물에 대한 항체의 성능을 평가하십시오. 표시된 교차 반응성(인간, 기타)은 외래성 Cas9를 발현하는 인간 세포주 또는 조직을 포함하는 응용 분야의 가능성을 시사합니다.

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