WB, IF/ICC, ELISA용 Anti-Cas9 토끼 단일클론 항체 - Q99ZW2

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: Cas9 기능 및 국소화

• Cas9(CRISPR-associated endonuclease Cas9/Csn1)는 Streptococcus pyogenes의 II형 CRISPR-Cas 적응 면역계의 효소 핵심을 형성하는 158.4 kDa RNA 유도 DNA 엔도뉴클레아제입니다. 관련 참고문헌: PMID:21455174
• 자연적인 생물학적 역할에서 Cas9는 CRISPR 좌위에 짧은 외래 서열(spacers)을 통합함으로써 침입하는 플라스미드 및 바이러스 DNA로부터 세균을 보호하며, 서열 특이적 면역을 위한 유전적 기억을 제공합니다. 관련 참고문헌: PMID:21455174
• Cas9는 표적 DNA 결합 및 뉴클레아제 활성을 위해 두 개의 작은 RNA인 CRISPR RNA(crRNA)와 trans-activating crRNA(tracrRNA)가 필요합니다. 이 가이드 RNA가 없으면 촉매 활성이 없습니다. 관련 참고문헌: PMID:24270795 PMID:24476820
• 표적 인식은 CRISPR 반복 서열 내의 짧은 protospacer adjacent motif(PAM; 5'-NGG-3')에 의해 제어되며, 이는 자기(self)와 비자기(non-self) DNA를 식별하는 역할을 합니다. PAM 결합은 DNA 이중나선 분리 및 이중이종체(heteroduplex) 형성을 시작합니다. 관련 참고문헌: PMID:24476820
• PAM 인식 시 Cas9는 crRNA와 상보되지 않는 표적 가닥의 엔도뉴클레아제 절단을 촉매한 다음 3'-5' 엑소뉴클레아제 절단(trim)을 수행합니다. 두 뉴클레아제 단계는 모두 마그네슘 또는 망간 이온에 의존합니다. 관련 참고문헌: PMID:24476820
• CRISPR RNA 성숙 과정에서 Cas9는 가공(processing)을 촉매하지 않습니다. 대신 pre-crRNA:tracrRNA 이중나선을 안정화하여 숙주 리보뉴클레아제 III에 의한 정확한 절단을 가능하게 합니다. 관련 참고문헌: PMID:24270795

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원은 Cas9의 아미노산 450-730을 포함하며, 이 영역은 HNH 뉴클레아제 도메인과 PAM 상호작용 도메인을 포함합니다. 웨스턴 블로팅의 경우 Cas9 형질전환 세포의 용해물 또는 정제된 재조합 전장 Cas9를 양성 대조군으로 사용하는 것을 고려하십시오. 예상 분자량은 158 kDa입니다.
• 면역형광/ICC의 경우 Cas9의 국소화는 가이드 RNA와 표적에 따라 달라질 수 있습니다. 적절한 대조군으로 고정 및 투과 처리 조건을 검증하고, 가능한 경우 Cas9 녹아웃(knockout) 또는 녹다운(knock-down) 세포주를 사용하여 특이성을 확인하십시오.
• ELISA의 경우 재조합 Cas9 단편을 사용하여 표준 곡선을 설정할 수 있습니다. 그러나 정량적 적용 전 관련 생물학적 매트릭스에서 내인성 Cas9 또는 기타 패밀리 구성원과의 교차 반응성을 평가해야 합니다.
• 이 항체는 인간 Cas9를 포함하여 광범위하게 교차 반응할 것으로 예측됩니다. 다른 종의 샘플을 사용할 때는 예상되는 반응성을 확인하기 위해 초기 검증을 권장합니다.

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