웨스턴 블롯(WB), ELISA용 Anti-DARPP32 Rabbit Monoclonal Antibody - Q9UD71

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: DARPP32 (PPP1R1B) 기능 및 위치

• PPP1R1B 유전자에 의해 암호화되는 DARPP32는 단백질 인산가수분해효소 1(PP1) 및 단백질 키나제 A(PKA) 조절을 통해 도파민 및 cAMP 신호를 통합하는 이중 기능 신호 전달 분자입니다.
• PKA에 의해 Thr34에서 인산화되면 PP1의 강력한 억제제로 작용하여 하류 신경 기질의 인산화를 변경하고 시냅스 가소성을 조절합니다.
• 이 단백질은 또한 사이클린 의존성 키나제 5(CDK5)에 의해 Thr75에서 인산화되어 PKA 억제제로 전환되며, 이는 선조체 신경세포에서 분자 스위치로서의 역할을 보여줍니다.
• DARPP32는 주로 세포질에 위치하며 선조체의 중간 가시 신경세포에서 풍부하게 발견되며, 여기서 도파민, 글루타메이트 및 기타 신경전달물질의 효과를 매개합니다.
• PPP1R1B 전사체의 대체 스플라이싱은 잘 특징지어진 전체 길이 형태 및 잘린 변이체를 포함한 여러 이소형을 생성하며, 이들은 서로 다른 기능적 특성을 가질 수 있습니다.
• 아세틸화 및 여러 부위에서의 인산화와 같은 번역 후 변형은 그 활성, 안정성 및 세포 내 분포를 미세 조정합니다.
• DARPP32 신호 전달의 조절 장애는 파킨슨병, 정신분열증 및 약물 중독을 포함한 신경학적 및 정신과적 장애와 관련이 있습니다.
• 표준 이소형의 이론적 분자량은 약 23 kDa으로, 웨스턴 블롯에서 관찰된 밴드와 일치합니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 웨스턴 블롯의 경우, DARPP32의 인산화 상태를 보존하기 위해 인산가수분해효소 및 프로테아제 억제제를 포함한 신선하게 준비된 RIPA 버퍼를 사용하십시오.
• DARPP32에서 흔히 관찰되는 응집 현상을 피하기 위해 환원성 로딩 버퍼를 사용하고 샘플을 70°C에서 10분 동안 가열하는 것을 고려하십시오.
• 면역원은 N-말단 영역(aa1-100)에 해당합니다; 이 항체는 전체 길이 및 특정 N-말단 단편을 모두 인식해야 합니다.
• 높은 서열 보존성으로 인해, 특히 마우스 또는 래트 조직으로 작업할 때 녹아웃 또는 siRNA 녹다운 샘플에서 항체 특이성을 검증하십시오.
• ELISA의 경우, 면역원 펩타이드 또는 재조합 DARPP32 단백질을 표준으로 사용하여 체커보드 적정을 통해 최적의 코팅 농도를 결정하십시오.
• 각 실험에 알려진 양성 대조군(예: 선조체 조직 용해물) 및 음성 대조군(예: 비신경 세포주)을 포함하십시오.
• DARPP32는 일부 샘플에서 낮은 풍부도의 인산화 단백질이므로, 고감도 ECL 기질 사용과 같은 신호 증강 전략이 검출에 필요할 수 있습니다.

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