WB, ChIP, ELISA용 Anti-DNMT3B 토끼 단일클론 항체 - Q9UBC3

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: DNMT3B 기능 및 국재화

• DNMT3B는 드 노보(de novo) DNA 메틸화를 촉매하는 DNA (시토신-5)-메틸전이효소로, 배아 발달 및 세포 분화에 필수적인 메틸화 패턴을 확립합니다.
• 핵심 영역 내의 뉴클레오솜 DNA를 우선적으로 메틸화하며, 크로마틴 구조와 유전자 발현을 조절하기 위해 히스톤 변형과 DNA 메틸화를 조정할 수 있습니다.
• 여러 대안 스플라이싱 이소폼이 존재합니다. 이소폼 1, 3 및 가능성 있는 2는 기능을 가지며, 이소폼 4와 5는 보존된 메틸전이효소 모티프가 없어 촉매 활동이 없을 가능성이 높습니다.
• 촉매 역할 외에도 DNMT3B는 CBX4 및 ZHX1과 상호 작용하여 전사적 코리프레서(corepressor)로 기능하며, 메틸화 활성과 독립적으로 유전자 침묵을 매개합니다.
• DNMT1 및 인자 CTCFL/BORIS와 연관하여 DNMT3B는 BAG1 프로모터에서 히스톤 H3K4 및 H3K9 디메틸화를 조절하여 전사 활성화에 기여합니다.
• DNMT3B는 체세포에서 DUX4 유전자의 침묵에 필요합니다. 이의 조절 불균형은 안면견같골근위축증 4형(FSHD4)과 연결됩니다. 관련 참고문헌: PMID:27153398
• DNMT3B는 핵에 국재하며 광범위하게 발현됩니다. 태아 간, 심장, 신장 및 태반에서 높은 수준을 보이고, 뇌 및 골격근과 같은 성인 조직에서는 낮은 수준으로 발현됩니다. 이소폼 1은 뇌, 골격근 및 PBMC에 존재하지 않습니다.
• 인산화 및 시트룰리네이션을 포함한 번역 후 변형은 DNMT3B의 안정성과 활동에 영향을 미칠 수 있으며, 유비퀴틴 유사 접합의 표적이 되기도 합니다.

실험 가이드 및 기술적 팁

• 항원은 인간 DNMT3B의 아미노산 206~360에 해당하며, 이 영역은 PWWP 도메인의 일부를 포함합니다. 검출을 보장하기 위해 샘플 시스템에서 기능적 이소폼의 발현을 확인하십시오.
• 웨스턴 블롯(WB)의 경우 96 kDa 근처에서 밴드를 예상하십시오. 일부 이소폼은 다른 크기로 이동할 수 있으므로 DNMT3B 녹아웃(knockout) 또는 녹다운(knockdown) 대조군으로 특이성을 검증하십시오.
• ChIP의 경우 DNMT3B가 핵 크로마틴 연관 단백질이므로, 가교(crosslinking), 전단(shearing) 및 항체 농도를 신중하게 최적화하고 적절한 음성 대조 영역을 포함하십시오.
• ELISA의 경우 선형성을 평가하기 위해 재조합 항원으로 표준 곡선을 생성하십시오. 이 항체는 매치드 페어(matched pairs)를 사용한 샌드위치 ELISA에서 포효 또는 검출에도 사용할 수 있습니다.
• DNMT3B는 많은 조직에서 낮은 수준으로 발현되므로, 민감한 검출을 위해 핵 농축 또는 높은 단백질 로딩을 고려하십시오.
• 비인간 종과의 교차 반응성은 보고되지 않았습니다. 인간 샘플 이외에 사용하는 경우 관련 시스템에서 검증하십시오.

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