유세포 분석(세포 내)용 항마우스 Ki67 단일클론 항체() - E9PVX6

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: Ki67의 기능 및 위치

• Mki67 유전자에 의해 암호화되는 Ki67은 유사분열 염색체와 결합하는 분자량 약 351 kDa의 대형 증식 마커 단백질입니다(UniProt 기준 350864 Da). 초기 유사분열에서는 염색체 반발인자로, 후기 유사분열에서는 염색체 유인인자로 작용하여 염색체가 적절히 분산되고 군집화되도록 합니다(PubMed:27362226). 관련 참고문헌: PMID:27362226
• 초기 유사분열 동안 Ki67은 인에서 염색체 표면으로 재배치되며, 길게 뻗은 브러시 형태의 구조를 형성합니다. 이러한 구조는 입체적 및 정전기적 장벽을 제공하고 계면활성제처럼 작용하여 염색체의 붕괴를 방지하고 독립적인 운동을 가능하게 합니다(PubMed:27362226). 관련 참고문헌: PMID:27362226
• 후기 유사분열에서 Ki67의 탈인산화와 보존된 염기성 패치의 노출은 염색체 표면에서 RNA 의존적 액체-액체 상분리를 유발하여 염색체 군집화를 촉진하고 핵 재조립을 용이하게 합니다. 이러한 상전이에 의해 Ki67은 반발인자에서 유인인자로 전환됩니다.
• Ki67은 초나선형 및 AT-풍부 DNA에 대한 선호성을 보이며 DNA에 결합하고, 후기 유사분열 동안 미성숙 리보솜 RNA에도 결합하여 상분리에 기여합니다. 그러나 유사분열 염색체의 내부 구조에는 기여하지 않습니다(PubMed:26949251). 관련 참고문헌: PMID:26949251
• 세포 내에서 Ki67은 간기 동안 인에 위치하며 유사분열 동안 염색체 표면으로 이동합니다. 주로 증식 중인 세포에서 발현되므로 세포 주기 활성화를 확인하는 신뢰성 높은 마커로 사용됩니다.
• 번역 후 변형에는 아세틸화, 인산화 및 유비퀴틴화가 포함되며, 이러한 변형은 유사분열 기능과 동적 위치를 조절합니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 세포 내 유세포 분석을 수행할 때는 메탄올 또는 사포닌 기반 완충액과 같이 핵 항원에 적합한 투과화 방법을 사용하여 인과 염색체에 존재하는 Ki67에 항체가 접근할 수 있도록 하십시오.
• 특정 세포 유형과 프로토콜에 적합한 최적의 염색 농도를 결정하기 위해 항체를 10^6개 세포당 0.1–1 µg 범위에서 적정하십시오.
• 염색 특이성을 검증하기 위해 증식 중인 마우스 세포주(예: NIH/3T3, CTLL-2) 또는 자극한 일차 림프구와 같은 양성 대조군, 그리고 음성 대조군(예: 동형 대조군 또는 휴지기 세포)을 포함하십시오.
• Ki67의 분포를 보존하기 위해 세포를 신속하게 고정하십시오. 장기간 보관하면 에피토프의 무결성에 영향을 줄 수 있습니다. 일반적으로 파라포름알데히드 고정 후 투과화하는 방법을 사용합니다.
• 접합체는 표준 적색 레이저(633–647 nm) 검출과 호환됩니다. 다중 분석을 수행하는 경우 적절한 필터 세트를 사용하고 보정을 최소화하십시오.

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