웨스턴 블롯 및 ELISA용 Anti-PCK1 단클론 항체 (PEPCK-C) - P35558

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: PCK1 기능 및 국소화

• PCK1 (phosphoenolpyruvate carboxykinase 1)은 PEPCK의 세포질 이소형(isoform)으로, 당신생(gluconeogenesis)의 속도 제한 효소 역할을 합니다. 옥살로아세테이트(oxaloacetate)를 포스포에놀피루베이트(phosphoenolpyruvate)로 가역적 탈카르복실화 및 인산화를 촉매하여, 시트르산 회로에서의 분해성(cataplerotic) 및 회복성(anaplerotic) 플럭스를 조절합니다. 관련 참고문헌: PMID:24863970, PMID:26971250, PMID:28216384

• 저 포도당 상태에서 PCK1은 당신생을 위해 옥살로아세테이트를 포스포에놀피루베이트로 전환하는 분해성 반응을 주도합니다. 반면 고 포도당 상태에서는 포스포에놀피루베이트를 옥살로아세테이트로 전환하는 회복성 반응을 촉진합니다. 관련 참고문헌: PMID:30193097

• 대사적 기능 외에도, AKT1에 의한 Ser-90 인산화는 PCK1을 세린-단백질 키나제로 전환시킵니다. 이 이중 기능(moonlighting) 키나제 활성은 소포체(ER)로의 이동을 유발하여, INSIG1/2를 인산화하여 SREBP 전사 인자를 방출하고 지질 생성 유전자 발현을 활성화합니다. 관련 참고문헌: PMID:32322062

• PCK1은 포스포에놀피루베이트를 글리코겐 및 펜토스 인산 경로로 공급함으로써 기억 CD8+ T세포 항상성(homeostasis)에 기여합니다 (유사성에 기초).

• 세포 내에서 PCK1은 주로 세포질에 존재하지만, AKT 매개 인산화 시 소포체로 이동합니다(translocates).

• 주요 조직 발현 부위는 간, 신장 및 지방세포를 포함하며, 이는 포도당 및 지질 대사에서의 핵심적인 역할을 반영합니다.

• 번역 후 수정(post-translational modifications)으로는 아세틸화, 유비퀴틴화 및 인산화가 포함되며, 구조적으로 PCK1은 GTP 결합 키나제, 리아제(lyase) 및 탈카르복실화 효소로 분류됩니다.

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원은 C-말단 근처의 아미노산 523~622에 걸친 합성 펩타이드로 만들어졌으며, Ser-90 인산화 부위와는 거리가 있습니다. 인산화 특이적 또는 이소형 특이적 검출 실험을 설계할 때 이 점을 고려하십시오.
• 웨스턴 블롯의 경우, PCK1을 고수준으로 발현하는 인간, 마우스 또는 랫트 간/신장 용해물(lysate)에서 검출을 확인하십시오. 당신생 유도(예: 단식/cAMP 처리)가 신호를 증폭시킬 수 있습니다.
• ELISA의 경우, 샌드위치 형식과의 항체 페어링 및 호환성을 테스트하십시오. 단클론 특성은 로트 간 일관된 특이성을 보장합니다.
• 예측 분자량이 69 kDa이므로, 적절한 겔 분해능 및 전달 조건을 확보하십시오. 번역 후 수정으로 인해 관찰되는 밴드 위치가 이동할 수 있습니다.

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