Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-S311 Rabbit pAb for WB, ELISA - Q04206

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: 전사인자 p65의 기능 및 위치

• NF-kappa-B는 거의 모든 세포 유형에 존재하는 다능성 전사인자로, 다양한 신호전달 캐스케이드의 종착점 역할을 합니다. 동종 또는 이종 이합체를 형성하며, 이종 이합체 RELA-NFKB1 복합체가 가장 풍부하고 전사 활성제로 작용합니다.
• RELA (p65)는 표적 유전자 프로모터의 kappa-B 부위에 이합체 특이적 친화도와 특이성으로 결합하여 전사를 직접 활성화하고, 다른 인자에 대한 염색질 접근성을 간접적으로 조절합니다.
• 자극받지 않은 세포에서 NF-kappa-B 복합체는 I-kappa-B 억제제에 의해 세포질에서 비활성 상태로 유지됩니다. 자극이 가해지면 I-kappa-B는 IKK에 의해 인산화되고 분해되어 RELA가 핵으로 이동하여 유전자 발현을 시작합니다.
• RELA는 활성, 안정성 및 단백질 상호작용을 조절하는 다수의 부위(예: S311)에서의 인산화, 아세틸화, 메틸화 및 유비쿼틴화를 포함한 광범위한 번역 후 변형을 받습니다.
• T 세포의 사이토카인 유전자 발현에 필수적이며, 이는 적응 면역 반응에서의 중요한 역할을 강조합니다.
  관련 참고문헌: PMID:15790681
• SARS-CoV-2 감염 중 인터페론 반응을 지배하는 주요 전사인자로 확인되었습니다. 관련 참고문헌: PMID:33440148
• 휴지 상태에서는 I-kappa-B에 의한 핵 위치 신호 마스킹으로 인해 주로 세포질에 위치하며, 활성화 후 빠르게 핵 내 축적이 일어납니다.
• 인산단백질, 아세틸화, 메틸화, Ubl 접합, 이소펩타이드 결합 및 S-니트로실화를 포함한 키워드로 주석 처리되어 있으며, 이는 이 주요 전사인자를 조절하는 복잡한 조절 네트워크를 반영합니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 면역원인 S311을 포함하는 합성 인산 펩타이드는 인산화 형태에 특이적인 항체를 생성하도록 설계되었습니다. WB 전에 라이세이트를 람다 포스파타제로 처리하여 인산화 특이성을 확인하십시오.
• 공급업체 권장 적합 적용 분야: WB 및 ELISA. WB의 경우, 20–30 µg의 전세포 라이세이트와 표준 차단 버퍼를 사용하고, 적절한 양성 대조군(예: TNF-α 자극 HeLa 세포)을 사용하여 약 60 kDa 부근의 밴드 크기를 검증하십시오.
• ELISA의 경우, 인산 펩타이드로 코팅하고 비인산화 대조 펩타이드를 음성 대조군으로 사용하여 부위 특이적 결합을 확인하는 것을 고려하십시오.
• 인간 및 마우스와 교차 반응합니다. 해당 종의 관련 세포주 또는 조직에서 초기 검증을 수행하십시오. TNF-α 또는 PMA/이오노마이신과 같은 자극으로 NF-kB 신호전달을 유도하여 인산화 신호를 향상시키는 것이 권장됩니다.
• 인산화 상태를 변경할 수 있는 강력한 멤브레인 스트리핑을 피하고, 재검사가 필요한 경우 저pH 또는 온화한 세제 완충액을 사용하십시오.

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