Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 Rabbit Polyclonal Antibody for WB, IF/ICC, ELISA - Q04206

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: 전사인자 p65의 기능 및 위치

• NF-kappa-B p65 서브유닛 (RELA)은 NF-kappa-B 패밀리의 중심 전사인자로, 60 kDa 단백질 (p65, NFKB3, CMCU, AIF3BL3로도 알려짐)을 암호화하며 면역 및 스트레스 반응에서 중요한 역할을 합니다. UniProt 항목 Q04206.
• NF-kappa-B 복합체는 동종 또는 이종 이합체로 존재합니다; RELA-NFKB1 (p50) 이종 이합체가 가장 풍부하며, 유전자 프로모터의 특정 κB DNA 모티프에 결합함으로써 전사 활성제로 기능합니다.
• NF-kappa-B의 활성화는 자극에 의한 IκB 억제제의 인산화 및 분해를 포함하며, 이는 RELA 복합체를 세포질에서 핵으로 이동시켜 자유롭게 합니다. 전사활성화 도메인에 위치한 Ser536에서의 RELA 인산화는 그 전사 활성을 강화하며, 정규(canonical) NF-κB 활성화의 특징입니다.
• RELA의 세포 내 위치는 엄격하게 조절됩니다: 휴지기 세포에서는 주로 IκB에 결합된 상태로 세포질에 존재하며, 유도 시에는 표적 유전자 발현을 조절하기 위해 핵 내에 축적됩니다. 면역형광법은 경로 활성화의 지표로서 핵 이동을 검출할 수 있습니다.
• RELA는 인산화, 아세틸화, 메틸화, S-나이트로실화, 유비퀴틴화 등에 의해 크게 변형되며, 이는 그 전사 출력을 미세 조정합니다. 이는 T-세포에서의 사이토카인 발현 (PubMed:15790681) 및 SARS-CoV-2 감염 중 제1형 인터페론 반응 (PubMed:33440148)에 필수적입니다. 관련 참고문헌: PMID:15790681 PMID:33440148
• RELA 유전자는 여러 아이소형을 암호화하며, 그 활성은 공동인자 및 크로마틴 리모델러와의 상호작용을 통해 조절되어, 단순한 핵 진입 이상의 복잡한 조절 계층을 강조합니다.

실험 지침 및 기술 팁

• Ser536에서의 인산화를 보존하기 위해 프로테아제 및 포스파타제 억제제 칵테일로 세포 또는 조직 용해물을 준비하십시오. Western blotting의 경우, SDS-PAGE로 단백질을 분리하고 최종 사용자가 검증한 시작 희석 배율로 이 항체를 사용하여 탐침하십시오; 60 kDa 근처의 강한 밴드가 예상됩니다.
• 면역형광법 또는 면역세포화학법 (IF/ICC)의 경우, 세포를 4% 파라포름알데히드로 고정하고 충분히 투과화시키십시오; 비특이적 결합을 최소화하기 위해 적절한 차단 버퍼를 사용하십시오. 염증성 자극 (예: TNF-α 처리) 하에서 NF-kB p65의 핵 이동을 조사하여 인산화 특이적 신호를 검증하십시오.
• ELISA 응용의 경우, 인산화 특이적 검출을 확인하기 위해 인산화 펩타이드 차단 대조군 사용을 고려하십시오. 특정 분석 조건에서 최적 농도를 결정하기 위해 항체를 적정하십시오.
• 인산화 역학은 세포 유형에 따라 다를 수 있습니다; 결과를 정확히 해석하기 위해 항상 양성 및 음성 대조군 (예: 자극 처리 vs. 미처리 세포)을 포함시키십시오.

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