WB, IP, ELISA용 항인산화 NF-kB p65/RelA (Ser468) 토끼 단클론 항체 - Q04206

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: NF-kB p65/RelA의 기능과 세포 내 위치

• 전사인자 p65(RelA)는 NF-kB 전사인자 복합체의 p65 서브유닛으로, 거의 모든 세포 유형에 존재하는 다기능 인자이며 염증, 면역, 분화, 세포 성장, 종양 발생 및 세포 사멸과 관련된 다양한 자극에 의해 시작되는 신호 전달 경로의 최종 종점 역할을 합니다.
• NF-kB는 Rel 도메인을 포함하는 단백질의 동형이량체 또는 이종이량체로 기능합니다. 가장 풍부한 형태는 RELA-NFKB1(p65-p50) 이종이량체입니다. 이러한 이량체는 카파-B DNA 부위에 뚜렷한 친화도로 결합하며, RELA-NFKB1 및 RELA-REL 복합체는 전사 활성인자로 작용합니다.
• NF-kB 활성은 번역 후 변형, 세포소기관 구획화, 보조인자 또는 공억제인자와의 상호작용을 포함한 여러 기전을 통해 조절됩니다. 비활성 NF-kB는 I-kB 억제 단백질에 의해 세포질에 유지되며, IK 매개된 I-kB의 인산화 및 분해 후 NF-kB 복합체가 방출되어 핵으로 이동합니다.
• RELA는 본래 DNA 결합 친화도가 약하지만 NF-kB 복합체의 DNA 결합 능력에 기여합니다. 또한 표적 프로모터에서 염색체 접근성을 조절하여 간접적으로 유전자 발현에 영향을 미칩니다.
• RELA는 T세포에서 사이토카인 유전자 발현에 필수적이며 적응성 면역 반응에서 중추적인 역할을 합니다. 관련 참고문헌: PMID:15790681
• SARS-CoV-2 감염 시 RELA는 인터페론 반응을 조절하는 핵심 전사인자로 작용하며 항바이러스 선천성 면역에서의 역할이 강조됩니다. 관련 참고문헌: PMID:33440148
• 세포 내에서 RELA는 세포질과 핵 사이를 이동합니다. 이 항체가 표적으로 하는 Ser468에서의 인산화를 비롯하여 아세틸화, 메틸화, S-니트로실화, 유비퀴틴 유사 접합 등 광범위한 번역 후 변형이 일어나며, 이러한 변형은 RELA의 활성, 안정성 및 상호작용을 조절합니다.

실험 가이드 및 기술 팁

• 웨스턴 블롯(WB)의 경우, Ser468의 인산화 신호를 보존하기 위해 프로테아제 및 포스파타아제 저해제가 첨가된 RIPA 완충액을 사용하여 용해물을 준비하십시오. SDS-PAGE 및 전사를 수행한 후 실험적으로 결정된 희석비로 항체를 반응시킵니다.
• 면역침전(IP) 실험에서는 사용하시는 세포 또는 조직 용해물에서 표적 단백질의 발현 수준이 충분한지 확인하십시오. 이 항체는 토끼 유래 단클론 항체이므로 종이 일치하는 2차 시약을 사용할 때 깨끗한 포획이 가능합니다.
• ELISA 기반 검출의 경우, 이 항체를 포획 또는 검출 시약으로 사용하는 것을 고려하시고 적절한 인산 특이적 대조군을 사용하여 귀하의 분석 시스템에서 직선성과 특이성을 검증하십시오.
• 이 항체는 사람, 생쥐, 쥐와 교차 반응하므로 이들 종 간의 비교 연구에 사용할 수 있습니다. 다만 각 종 및 처리 조건에 대해 양성 및 음성 대조군을 포함하여 성능을 항상 확인하시기 바랍니다.
• 권장 희석비는 실험 조건 및 검출 방법에 따라 달라질 수 있으므로 각 적용 분야 및 샘플 유형에 맞춰 항체 농도를 최적화하십시오.

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