WB 및 ELISA용 항인 Phospho-Raf1-S259 토끼 단클론 항체 - P04049

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: RAF1의 기능과 위치

• RAF1(c-RAF 또는 Raf-1로도 알려짐)은 세린/트레오닌 단백질 키나아제로, 막 결합 Ras GTP효소와 다운스트림 MAPK/ERK 신호 캐스케이드 사이에서 중요한 조절 연결고리 역할을 하며 증식, 분화, 세포사멸 및 생존과 같은 세포 운명 결정을 조절합니다.
• 활성화 시 RAF1은 이중 특이성 키나아제 MEK1/2를 인산화하고 활성화하며, MEK1/2는 다시 ERK1/2를 인산화시켜 유전자 발현과 세포 반응을 조절하는 신호를 전달합니다.
• 인산화된 RAF1(예: Ser-338 및 Ser-339)은 세포사멸 촉진 단백질 BAD를 직접 인산화하여 세포 생존을 촉진합니다. 또한 아데닐릴 시클라아제(ADCY2/5/6)를 인산화하고 포스파타아제 PPP1R12A를 조절합니다.
• RAF1은 다중 신호 경로에 영향을 미칩니다: NF-κB 활성화를 촉진하는 동시에 ROCK2(운동성), ASK1/MST2(세포사멸), RB1(증식/혈관신생)과 같은 효과인자를 억제합니다.
• 세포사멸 자극 하에서 RAF1은 미토콘드리아로 이동하여 BCL2에 결합하고 BAD를 치환시켜 추가적인 세포사멸 억제 기전을 제공합니다.
• RAF1은 Rho 신호를 조절하여 세포 이동에 관여하며 정상적인 상처 치유에 필요합니다. 또한 오클루딘(OCLN)과 같은 긴밀 연접 단백질의 전사 억제를 통해 발암성 형질전환에 기여합니다.
• 이 단백질은 주로 세포질과 세포막에 위치하지만 특정 조건 하에서는 미토콘드리아와 핵에서도 발견될 수 있습니다.
• RAF1은 다양한 조직에서 발현되며, 골격근에서는 아이소폼 1이 아이소폼 2보다 더 풍부하게 존재합니다.

실험 가이드 및 기술 팁

• 면역원은 인간 RAF1(Ser259)을 중심으로 한 합성 인산화 펩티드입니다(P04049). 생성된 이 항체는 Ser259에서 인산화된 RAF1을 특이적으로 인식할 것으로 예상되며, 인산화효소 처리된 샘플과 처리되지 않은 샘플의 신호를 비교하여 특이성을 확인하십시오.
• 웨스턴 블롯(WB)의 경우 RAF1을 발현하는 것으로 알려진 인간 또는 랫드 세포의 단백질 추출물을 사용하십시오. 환원 조건 하에서 약 73 kDa 위치에서 밴드가 관찰되어야 합니다. 항상 적절한 양성 및 음성 대조군(예: 혈청 결핍 배양 vs 성장 인자 자극 용해물)을 포함시키십시오.
• ELISA의 경우 인산화 펩티드 면역원에 대해 항체를 적정하고 관련 생물학적 매트릭스에서 검증하여 선형 검출을 보장하십시오. 인산화 수준을 정규화하기 위해 전체 RAF1 항체와 짝을 이루어 사용하는 것을 고려하십시오.
• 이 항체는 아이스 팩으로 공급되므로 반복적인 동결-해동 주기를 피하고 권장되는 조건에서 보관하여 활성을 유지하십시오.

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