Anti-Phospho-SMO (S611/S615) Rabbit Polyclonal Antibody for WB, ELISA - Q99835

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: SMO 기능 및 위치

• SMO(smoothened)는 G 단백질 연결 수용체이자 Hedgehog 신호 경로의 핵심 변환기로, 배아 발달과 성체 조직 항상성에 필수적입니다.
• Hedgehog 리간드가 없을 때, SMO는 패치 수용체(PTCH1/PTCH2)에 의해 억제되며, 이는 콜레스테롤이 SMO에 접근하는 것을 제한합니다. 패치에 대한 Hedgehog 결합은 이 억제를 해제하여 SMO가 일차 섬모로 이동하고 콜레스테롤에 의해 활성화되도록 합니다. 관련 참고문헌: PMID:27437577 PMID:28344083 PMID:32929279
• 활성화되면, SMO는 G 단백질 G(i)와 연결되어 아데닐산 고리화효소를 억제하고 cAMP 수준을 감소시킵니다. 이는 단백질 키나제 A(PKA)의 억제를 해제하여 GLI 전사 인자의 안정화와 활성화로 이어집니다. 관련 참고문헌: PMID:28344083 PMID:31168089
• 활성 SMO는 또한 세포막에서 PKA의 촉매 소단위체인 PRKACA를 격리함으로써 PKA를 직접적으로 억제하여 GLI 전사 인자의 인산화와 처리를 방지할 수 있습니다. 관련 참고문헌: PMID:36202993 PMID:39138140
• SMO는 주로 세포막과 일차 섬모막에 위치하며, 이는 Hedgehog 신호 전달의 주요 구획입니다.
• 이 항체는 세린 잔기 611과 615의 인산화를 특이적으로 인식하며, 이는 번역 후 변형으로 SMO의 구조, 활성 또는 이동에 영향을 미칠 가능성이 있습니다.
• SMO의 돌연변이는 다양한 발달 장애와 암과 관련되어 있어, 그 중요한 조절 역할을 강조합니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 면역원은 인간 SMO의 Ser611/Ser615 주변의 합성 인산화 펩타이드입니다. 웨스턴 블롯의 경우 약 86 kDa 근처의 밴드가 예상됩니다. 인산화 특이성을 확인하려면 람다 포스파타제로 샘플을 처리하거나 비인산화 펩타이드 경쟁자를 사용하는 것을 고려하십시오.
• SMO 인산화 상태는 역동적일 수 있으므로, 세포 용해 과정에서 포스파타제 억제제 칵테일을 사용하는 것이 좋습니다. 또한 적절한 양성 및 음성 대조군(예: Hedgehog로 자극된 대 자극되지 않은 세포)을 포함시키십시오.
• 웨스턴 블롯 검출은 블로킹과 항체 희석의 최적화가 필요할 수 있습니다. 다양한 농도 범위를 테스트하고 활성 Hedgehog 신호를 가진 인간 세포주나 조직(예: SHH 처리된 섬유아세포)에서 검증하십시오.
• ELISA의 경우, 이 항체는 인산화된 SMO 펩타이드나 세포 용해물 검출에 적합할 수 있습니다. 인산화 특이적 펩타이드와 비인산화 대조군을 사용하여 결합을 확인하여 특이성을 평가하십시오.

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