WB, IF/ICC, IP, ELISA용 Anti-PKM2 단일클론 항체 - P14618

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: PKM2 기능 및 위치

• PKM2는 인산엔올피루브산(PEP)에서 ADP로 인산기를 전달하여 ATP를 생성함으로써 해당작용의 최종 속도 결정 단계를 촉매합니다. 이 효소의 활성은 고활성 테트라머와 거의 비활성 다이머 사이의 동적 평형에 의해 조절되며, 이는 포도당 탄소가 에너지 생산 또는 생합성 쪽으로 향하는 운명을 결정합니다. 관련 참고문헌: PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• PKM 유전자는 선택적 스플라이싱을 통해 두 가지 주요 이소형을 생성합니다: 성체 M1 이소형(PKM1)과 배아 M2 이소형(PKM2). PKM2는 낮은 본질적 피루브산 키나아제 활성을 가지며 D-프럭토스 1,6-이인산(FBP)에 의한 알로스테릭 활성화가 필요하지만, PKM1은 구성적으로 활성입니다. 관련 참고문헌: PMID:18337823 PMID:20847263
• 세포질 대사 역할 외에도, PKM2는 핵 단백질 키나아제로 기능합니다. EGF 수용체 활성화와 같은 자극에 의해 PKM2는 핵으로 이동하여 Tyr-705의 STAT3 및 Thr-11의 히스톤 H3을 포함한 표적을 인산화하여, 세포 증식, 혈관신생(예: VEGFA) 및 종양형성에 관여하는 유전자의 전사를 촉진합니다. 관련 참고문헌: PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• PKM2는 배아 줄기세포, 배아암세포 및 암세포를 포함한 고도로 증식하는 세포에서 주로 발현되어 잘 확립된 종양 바이오마커입니다. 성체 이소형 PKM1은 정상 성체 조직에서 발현되며 일반적으로 종양에서는 존재하지 않습니다. 관련 참고문헌: PMID:18337823
• PKM2는 세포질과 핵 모두에 위치합니다. 그 핵 이동은 다양한 신호 전달 경로에 의해 유도되며, 비대사적, 발암 기능에 중요합니다.
• 아세틸화, 인산화, 히드록실화 및 메틸화와 같은 번역 후 변형은 PKM2의 대사 활성, 단백질 안정성 및 핵 수입을 엄격히 조절하여 세포 대사 상태를 신호 네트워크와 연결시킵니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 면역원은 인간 PKM2 (NP_002645.3)의 아미노산 380–480에 걸친 합성 펩타이드로, PKM2를 M1 이소형과 구별하는 독특한 C-말단 영역 내에 위치합니다. 이 설계는 PKM1에 비해 PKM2에 대한 높은 특이성을 시사합니다.
• 웨스턴 블롯의 경우, PKM2의 예측 분자량은 약 58 kDa입니다. 적절한 양성 대조군(예: 인간 암세포주)을 사용하여 항체의 성능을 검증하고, 일차 항체 희석 및 노출 시간을 최적화하는 것을 고려하십시오.
• 면역형광/면역세포화학(IF/ICC)에서는 PKM2 위치(세포질 및 핵 모두 가능)를 보존하기 위해 다양한 고정 및 투과 프로토콜을 테스트하십시오.
• 면역침전(IP)의 경우, 단백질 복합체를 유지하기 위해 네이티브 용해 조건을 사용하고 표적 포획 효율을 확인하십시오.
• ELISA 수행 시, 재조합 PKM2 단백질로 표준 곡선을 설정하고 관련 샘플 매트릭스에서 민감도와 특이성을 검증하십시오.
• 마우스 및 래트 PKM2와의 교차 반응성이 표시됩니다; 종 특이적 대조군을 사용하여 특정 실험 시스템에서 표적 인식을 확인하십시오.

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