WB, ELISA용 Anti-RAG1 토끼 다클로날 항체 - P15918

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: RAG1 기능 및 국소화

• RAG1(재조합 활성화 단백질 1, RAG-1 및 RNF74라고도 함)는 RAG 복합체의 촉매 성분으로, 발달 중인 림프구에서 다양한 면역글로불린 및 T-세포 수용체 유전자를 조립하는 V(D)J 재조합에 필수적입니다.
• 보존된 재조합 신호 서열(RSS)에 직접 결합하고 2단계 메커니즘을 통해 부위 특이적 DNA 이중 가닥 절단을 촉매합니다: 헵타머 상류의 초기 절단(nicking) 후 트랜스에스테르화를 통한 헤어핀 형성으로, 뭉툭한 신호 말단과 헤어핀 형태의 코딩 말단을 생성합니다. 모든 촉매 활동에는 RAG2가 필요합니다.
• 엔도뉴클레아제 활동 외에도 RAG1은 알려지지 않은 부위에서 히스톤 H3를 모노유비퀴틴화하는 E3 유비퀴틴-단백질 리가제로 기능하며, 이는 V(D)J 재조합의 결합 단계에 필요한 수정입니다. 또한, Lys-4에서의 히스톤 H3 트리메틸화(H3K4me3)는 절단 단계를 모두 자극합니다.
• RAG1은 핵에 국소화하여 크로마틴과 상호작용하여 재조합 이벤트를 매개합니다.
• 발현은 성숙 중인 림프구 세포로 제한되며, 이는 림프구 발달에서의 역할과 일치합니다.
• RAG1은 또한 ATM 의존적 재배치를 통해 하나의 면역글로불린 대립유전자를 동원체 주변 이질염색질로 이동시켜 전-B 세포 대립유전자 배제에 참여하며, 두 번째 대립유전자의 재조합을 방지하고 클론성을 보장합니다.
• 이 단백질은 대안 스플라이싱을 거치며, DNA 결합, 엔도뉴클레아제, 가수분해효소, 금속 결합(아연 핑거), 전이효소, ubl 접합 및 중증 복합 면역결핍증(SCID)과 관련된 질병 변이와 같은 키워드에 의해 그 다기능적 특성이 강조됩니다.

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원은 DNA 결합 도메인을 포함하는 인간 RAG1의 N-말단 영역(아미노산 1-270)에 걸쳐 있습니다. 이 영역은 대안 스플라이싱으로 인해 발생하는 여러 아이소폼을 검출할 수 있습니다.
• 웨스턴 블로팅의 경우 예상 분자량은 ~119 kDa입니다. 고분자량 단백질의 경우 6-8% SDS-PAGE 젤을 사용하고 이동 시간을 연장하는 것을 고려하십시오.
• ELISA 프로토콜은 재조합 RAG1 단백질 또는 펩타이드 코팅을 활용할 수 있습니다. 특이성을 보장하기 위해 샘플 매트릭스에서 분석 조건을 검증하십시오.
• 마우스와의 교차 반응성이 예상됩니다. 해당 시스템에서 사용하는 경우 마우스 림프조직 또는 세포주에서 성능을 검증하십시오.
• 인간 또는 마우스 림프구 세포주(예: Jurkat, Raji, EL4)의 단백질 추출물은 적합한 양성 대조군일 가능성이 높으며, 비림프구 세포주는 음성 대조군으로 사용할 수 있습니다.

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