WB, IF/ICC, ELISA용 Anti-SARS-CoV-2 3CLpro 폴리클론항체 - P0DTC2

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: SARS-CoV-2 3CLpro 기능 및 위치

• 스파이크 당단백질(S)은 SARS-CoV-2가 숙주 세포로 들어가는 것을 매개하는 I급 바이러스 융합 단백질입니다. 전구체로 합성되어 단백질분해적으로 S1 및 S2 소단위로 절단됩니다.
• S1 소단위에는 인간 ACE2 수용체(안지오텐신 전환 효소 2)와 결합하여 바이러스가 숙주 세포에 부착되도록 촉진하는 수용체 결합 도메인(RBD)이 포함되어 있습니다. 관련 참고문헌: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• 대체 진입 경로는 뉴로필린-1(NRP1), NRP2, 인테그린 또는 ASGR1을 활용하며, 이는 특히 낮은 ACE2 수준을 발현하는 후각 상피 세포에서 조직 친화성에 기여할 수 있습니다. 관련 참고문헌: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• S2 소단위는 힌지 의존적 구조 변화를 통해 막 융합을 매개하며, TMPRSS2 또는 카텝신 L과 같은 숙주 프로테아제에 의한 S2' 부위 절단이 필요한, 융합 전 상태에서 융합 후 헤어핀 상태로 전환됩니다. 관련 참고문헌: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• S의 줄기 도메인에는 세 개의 힌지가 포함되어 있어 수용체 결합 헤드에 놀라운 방향 자유도를 제공하며, 이는 면역 회피를 촉진할 수 있습니다. 관련 참고문헌: PMID:32817270
• 세포 내 위치에는 바이리온 막, 숙주 소포체-골지 중간 구획(ERGIC) 막 및 숙주 세포막이 포함되며, 이는 조립, 배출 및 진입에서의 역할과 일치합니다.
• 이 단백질은 심하게 당화되어 있고 보존된 이황화 결합, 코일드코일 영역 및 막관통 도메인을 포함합니다; 또한 초항원 특성을 나타내며 면역 회피에 기여합니다.
• 분자량은 약 141 kDa이며, 중화항체, 진단 분석 및 백신 개발을 위한 주요 표적입니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 면역원이 재조합 3CLpro 단편(아미노산 1-306)이므로, 특이성을 검증하기 위해 SARS-CoV-2 감염 세포의 리세이트 또는 정제된 재조합 3CLpro와 같은 적절한 양성 대조군을 사용하십시오.
• 웨스턴 블롯의 경우, 블로킹 및 항체 희석 조건 최적화를 고려하십시오; 약 34 kDa(전장 3CLpro)에서 밴드가 예상되지만, 공급업체는 141 kDa 밴드(스파이크 단백질에 해당할 가능성 있음)를 보고합니다. 적절한 분자량 마커와 대조 항원으로 검출된 밴드를 확인하십시오.
• 면역형광/ICC 실험에서는 세포 내 프로테아제 검출을 위한 투과화 단계를 포함하고, 세포 내 위치를 평가하기 위해 세포소기관 마커로 대조염색하십시오.
• ELISA의 경우, 폴리클론 특성으로 인해 샌드위치 형식에서 포획 및 검출 항체 모두로 사용할 수 있습니다. 특이성과 신호 대 잡음비를 개선하기 위해 별개의 에피토프에 대한 단클론항체와 짝을 이루십시오.
• 다른 코로나바이러스의 3CLpro와의 잠재적 교차 반응성을 고려하십시오; 서열 정렬 및 경쟁 억제 분석이 특이성 확인에 도움이 될 수 있습니다.
• 성능이 샘플 유형 및 고정 방법에 따라 달라질 수 있으므로 항상 특정 실험 시스템에서 항체를 검증하십시오.

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