WB, DB, IF/ICC, IP 및 ELISA용 항SARS-CoV-2 스파이크 S2 ECD 토끼 다클론 항체 - P0DTC2

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: 스파이크 당단백질(S)의 기능과 위치

• 스파이크(S) 당단백질은 S1과 S2 서브유닛으로 절단되는 클래스 I 바이러스 융합 단백질입니다. S1에는 수용체 결합 도메인이 포함되어 있고, S2는 단백질을 고정하고 막 융합을 수행합니다.
• S1은 숙주 수용체 ACE2에 결합하여 감염을 시작합니다. 대체 침입 수용체로는 뉴로필린-1(NRP1), 뉴로필린-2(NRP2), 인테그린, 아시알로당단백질 수용체 1(ASGR1)이 있으며, 이들은 ACE2 발현이 낮은 세포에서 SARS-CoV-2의 조직 친화성에 기여할 수 있습니다.
  관련 참고문헌:
  PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086, PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• 숙주 TMPRSS2(세포 표면) 또는 카텝신 L(내포체)에 의한 S2' 부위에서 S2의 단백질 분해 절단은 비가역적인 구조 변화를 유발하며, 이로 인해 바이러스 외피가 숙주 막과 융합하여 바이러스 게놈이 세포질로 방출됩니다.
  관련 참고문헌:
  PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• S2 서브유닛에는 융합이 일어나기 위해 바이러스 막과 세포 막을 가깝게 배치시키는 6-나선 다발로 접히는 헵타드 반복 영역(HR1 및 HR2)이 포함되어 있습니다.
• 아세포 수준에서 스파이크 단백질은 비리온 막, 숙주 ER-골지 중간 구획(ERGIC) 및 숙주 세포 원형질막에 위치합니다.
• 스파이크는 고도로 N-당화 및 팔미토일화되어 있으며 이황화 결합을 포함하고 초항원으로 기능합니다. 또한 숙주 선천성 면역 반응을 억제하고 테더린에 대응합니다.

실험 가이드 및 기술 팁

• 면역원은 융합 펩티드와 헵타드 반복을 포함한 보존된 기능 요소를 덮는 S2 세포외 도메인(아미노산 686-1214)에 걸쳐 있습니다. 이 설계는 S1이 탈락한 후에도 S2를 검출할 수 있게 해줍니다.
• 웨스턴 블롯의 경우, 환원 조건에서 전장 스파이크 단백질은 ~141 kDa에서 이동합니다. 절단된 S2의 경우 ~70-80 kDa 밴드가 관찰될 수 있습니다. 사용자의 용해 및 샘플 전처리 조건을 검증하십시오.
• 면역형광/ICC에서는 원형질막 외에도 세포내 구획(ERGIC)에 위치하는 스파이크를 검출하기 위해 투과화 단계를 포함하십시오.
• 포획 ELISA의 경우, 전장 스파이크를 특이적으로 측정하기 위해 이 pAb를 S1 서브유닛에 대한 단클론 항체와 짝짓는 것을 고려하거나, S2 수준을 정량하기 위한 검출 시약으로 사용하십시오.
• 닷 블롯(DB)은 세포 용해물 또는 재조합 단백질에서 항원 발현을 빠르게 스크리닝하는 데 사용할 수 있습니다. 항원 농도와 완충액 조건을 최적화하십시오.
• 면역침전(IP)은 스파이크 복합체를 포획할 수 있습니다. 비특이적 결합을 평가하기 위해 적절한 음성 대조군을 포함하십시오.

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