Anti-TriMethyl-Histone H3-K9 (Q16695/P68431) Rabbit Monoclonal Antibody for Epigenetics

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: 히스톤 H3 기능 및 국재화

• 기능: 히스톤 H3는 뉴클레오솜의 핵심 구성 요소로, DNA를 감아 크로마틴으로 응축하여 전사, DNA 복구, 복제 및 염색체 안정성을 조절합니다. 히스톤 코드라고 알려진 히스톤의 번역 후 변형은 크로마틴 구조와 유전자 발현을 조절합니다.
• 세포 내 국재화: 주로 핵에 위치하며 세포 주기 내내 염색체와 결합되어 있습니다.
• 조직 특이성: 히스톤 H3 변이체인 H3.1t (Q16695)은 정세포에서 특이적으로 발현되는 반면, 전형적인 H3.1 (P68431)은 조직 전반에 걸쳐 발현됩니다.
• 번역 후 변형: 히스톤 H3는 다양한 공유 변형의 대상이 되며, 라이신 9는 핵심 조절 부위입니다. 라이신 9는 시트룰린화(아르기닌을 시트룰린으로 전환) PMID:15345777 PMID:16567635 및 대칭 디메틸아르기닌화를 겪을 수 있습니다. 또한, 라이신 9의 트리메틸화(H3K9me3)는 잘 알려진 억제성 크로마틴 마커입니다. 이 항체는 라이신 9에서 트리메틸화된 히스톤 H3를 특이적으로 검출합니다. 관련 참고문헌: PMID:15345777, PMID:16567635

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원 설계: 이 항체는 사람 히스톤 H3의 라이신 9를 포함하는 합성 트리메틸화 펩타이드를 사용하여 제작되었습니다. 이 항체를 사용할 때는 변형되지 않은 H3 펩타이드나 단일 메틸, 디메틸, 아세틸 등 대체 변형이 있는 펩타이드에 대해 테스트하여 특이성을 확인함으로써 트리메틸화 상태에 대한 선택성을 검증하는 것이 좋습니다.
• 웨스턴 블롯(WB) 및 도트 블롯(DB): WB의 경우 염기성 단백질을 농축하기 위해 표준 히스톤 추출 프로토콜(산 추출 또는 고염 추출)을 사용하십시오. 비특이적 결합을 최소화하기 위해 적절한 차단 및 항체 희석을 보장하십시오. DB의 경우 필요한 경우 다른 히스톤 변형에 대한 교차 반응성을 확인하십시오.
• 면역형광/면역세포화학(IF/ICC): 핵 형태와 항원 접근성을 유지하기 위해 투과화(permeabilization) 및 고정 조건을 최적화하십시오. DAPI를 사용한 이중 염색은 핵 내 위치를 확인하는 데 도움이 될 수 있습니다.
• ELISA: 고처리량 스크리닝에 사용하십시오. 특이성을 평가하기 위해 합성 메틸화 펩타이드와 비메틸화 펩타이드로 플레이트를 코팅하는 것을 고려하십시오.
• 크로마틴 면역침전(ChIP, ChIP-seq) 및 CUT&Tag: 이 항체는 H3K9me3 마크가 있는 크로마틴의 ChIP 기반 농축에 적합합니다. 가교 결합 ChIP(X-ChIP) 또는 네이티브 ChIP(N-ChIP)를 사용할 수 있으며, 양성 및 음성 대조 유전자 좌위(예: 이질크로마틴 대 활성 프로모터)로 검증하십시오. CUT&Tag의 경우 저입력 또는 단일 세포 응용을 위한 출판된 프로토콜을 따르십시오. 대규모 실험 전에 관련 샘플 시스템에서 항체를 검증하십시오.

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