유세포 측정용 APC/Cyanine7 항마우스 CD45 토끼 단클론 항체 - P06800

주요 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: CD45의 기능과 위치

• PTPRC 유전자에 의해 암호화되는 수용체형 티로신 단백질 포스파타아제 C(CD45)는 면역 세포의 신호 전달에 필수적인 막횡단 포스파타아제입니다. 대체 스플라이싱을 통해 서로 다른 세포외 도메인을 가지는 여러 아이소폼(예: CD45R, B220)이 생성됩니다.
• CD45는 항원 수용체를 통한 T 세포 활성화에 필요하며, DPP4와 결합 시 양성 조절자로 작용합니다. 또한 T 세포 수용체 신호 전달의 임계값을 조절합니다.
• 세포내 영역에는 두 개의 단백질 티로신 포스파타아제(PTP) 도메인이 있으며, 첫 번째 도메인이 촉매 활성을 가지고 두 번째 도메인은 기질 특이성과 활성에 영향을 줍니다.
• CD45는 LYN, FYN, LCK와 같은 Src 계열 키나아제를 탈인산화하여 림프구에서 이들의 키나아제 활성과 하류 신호 전달 캐스케이드를 조절합니다.
• 항원 제시 세포(예: 미성숙 수지상 세포)에서 CLEC10A와의 상호작용은 T 세포 활성을 미세 조정하여 자가 내성 유지에 기여합니다.
• CD45는 세포막에 위치하며 막 래프트와 면역 시냅스에 풍부하게 존재하여 수용체 신호 통합에 적합한 위치를 차지합니다.
• 번역 후 변형에는 광범위한 N-연결 및 O-연결 글리코실화가 포함되며, 이는 아이소폼 발현과 단백질-단백질 상호작용에 영향을 줍니다.
• 백혈구 공통 항원(L-CA) 및 Ly-5로도 알려진 CD45는 모든 유핵 조혈 세포에서 광범위하게 발현되며, 아이소폼 특이적 패턴이 백혈구 아집단을 구분합니다.

실험 가이드 및 기술 팁

• 면역원은 세포외 도메인의 대부분을 덮는 마우스 CD45의 아미노산 26~566에 걸쳐 있습니다. 이 디자인은 여러 CD45 아이소폼을 인식할 수 있지만 사용자는 자신의 실험 시스템에서 아이소폼 특이성을 검증해야 합니다.
• 유세포 측정의 경우, 최적의 염색 농도를 결정하기 위해 마우스 백혈구에서 APC/Cyanine7 접합 항체의 적정 농도를 확인하고 적절한 아이소타입 및 형질감소-1(FMO) 대조군을 포함해야 합니다.
• APC/Cyanine7은 원적외선 채널(~780 nm)에서 방출되어 FITC, PE, APC와 같은 일반적인 형광단과 명확하게 분리됩니다. 호환되는 레이저 라인(예: 633 nm 여기)과 적절한 필터 세트를 사용하십시오.
• 백혈구에서 CD45 발현이 높기 때문에 비특이적 결합을 유발할 수 있는 과도한 염색을 피하십시오. 유세포 측정에서 세포 1백만개당 0.25–1.0 µg의 일반적인 시작 희석 농도가 합리적인 기준점입니다.
• 패널 설계 시, 살아있는 면역 세포를 게이팅하기 위해 CD45를 범-백혈구 마커로 고려한 다음, 면역 표현형 분석을 위해 계통 특이적 항체(예: CD3, CD19)와 조합하십시오.

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