디메틸-히스톤 H3-K4 토끼 다클론 항체 (Q16695/P68431), WB, ChIP, ChIP-seq, IHC-P 적용 가능

주요 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: 히스톤 H3.1t/히스톤 H3.1의 기능과 위치

히스톤 H3는 염색질의 기본 반복 단위인 뉴클레오좀의 핵심 구성 요소입니다. 히스톤 H2A, H2B, H4와 함께 8량체를 형성하며, 여기에 147개 염기쌍의 DNA가 감겨 게놈을 압축하고 DNA 접근성을 조절합니다. 이 구조는 전사, 복제, 수리 및 염색체 안정성을 포함한 DNA 주형 과정에 필수적입니다.

표준 히스톤 H3.1 변이체는 여러 유전자(예: HIST1H3A ~ HIST1H3J)에 의해 암호화되며 S기 동안 새로 복제된 DNA에 침착됩니다. 반면 H3.1t 아이소폼(유전자 H3-4 / HIST3H3)은 정소 특이 변이체로, 주로 정소 세포에서 발현되며 정자 형성 과정에서 염색질 리모델링에 관여할 가능성이 있습니다.

히스톤 H3는 유연한 N-말단 꼬리에서 광범위한 번역 후 변형(PTM)을 거쳐 복잡한 조절 '히스톤 코드'를 형성합니다. 알려진 PTM으로는 메틸화, 아세틸화, 인산화, ADP-리보실화, 유비퀴틴화 등이 있습니다. 라이신 4의 메틸화(H3K4)는 핵심 표지입니다: 디메틸화(H3K4me2)는 프로모터와 인핸서 같은 활성 및 대기 상태의 유전자 조절 요소와 연관되어 있습니다.

이 항체는 K4 잔기를 포함하고 종 간에 고도로 보존된 인간 히스톤 H3의 N-말단 꼬리(아미노산 1-100)에 상응하는 합성 펩티드로 생성되었습니다. 이 항체는 K4의 디메틸화 형태를 특이적으로 인식합니다.

히스톤 H3는 세포핵에 위치하며 염색체의 구조적 구성 요소입니다.

관련 참고문헌: PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

실험 가이드 및 기술 팁

• 면역원이 히스톤 H3의 N-말단 꼬리를 포함하므로 K4 잔기가 포함된 영역을 인식할 수 있습니다. 메틸화 특이 검출을 위해 적절한 펩티드 차단 분석 또는 돌연변이 히스톤 대조군으로 검증하십시오.
• 웨스턴 블로팅(WB)의 경우 히스톤 농축 추출물 또는 전체 세포 용해물을 사용할 수 있습니다. 예상되는 밴드는 약 15 kDa입니다. 배경을 최소화하기 위해 고품질 전사 막을 사용하고 차단 시간을 늘리는 것을 고려하십시오.
• 염색질 면역침전(ChIP) 및 ChIP-seq에서 이 항체는 H3K4me2 분포 매핑에 적합할 수 있습니다. 특이성을 평가하기 위해 양성 대조 유전자좌(예: 활성 프로모터)와 음성 대조 유전자좌(예: 유전자간 영역)를 포함하십시오. ChIP-seq 수행 시 특정 실험 설계에 따라 라이브러리 제작 및 시퀀싱 깊이를 최적화해야 합니다.
• 면역조직화학(IHC-P) 및 면역형광(IF/ICC)의 경우 항원 회수(예: 열 매개 시트르산 완충액 pH 6.0)와 투과화가 검출력을 향상시킬 수 있습니다. 에피토프 가용성에 영향을 줄 수 있으므로 다양한 고정 방법(예: 포르말린 대 메탄올)을 테스트하십시오.
• H3 N-말단 서열이 고도로 보존되어 있으므로 인간, 마우스, 래트 및 기타 종에서 교차 반응이 예측됩니다. 새로운 종에서 사용하는 경우 서열 정렬로 에피토프 보존을 확인하고 양성 대조 실험을 수행하는 것을 고려하십시오.
• 메틸화 특이 항체는 다른 메틸라이신 표지와 교차 반응을 보일 수 있습니다. 특이성을 확인하려면 디메틸-K4와 기타 변형 펩티드를 사용한 경쟁적 펩티드 차단 실험을 포함하십시오.
• 최적 희석 비율은 각 분석마다 경험적으로 결정해야 합니다.

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