DiMethyl-Histone H3-K79 Rabbit Polyclonal Antibody (Q16695/P68431) – WB, IHC-P, ChIP-seq 검증 완료

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: 히스톤 H3 기능 및 국재화

• 히스톤 H3는 뉴클레오솜의 핵심 구성 요소로, DNA를 크로마틴으로 감싸고 응축하는 데 필수적입니다. 이러한 구조적 조직은 DNA 접근성을 조절하며 전사, DNA 복구, 복제 및 염색체 안정성에서 중심적인 역할을 합니다. 관련 참고문헌: UniProt Q16695, UniProt P68431

• 히스톤 H3는 여러 변이체로 존재합니다. 전형적인(canonical) 히스톤 H3.1 (H3C1–H3C12와 같은 유전자로 암호화됨)은 만연하게 발현되는 반면, 고환 특이적 변이체인 H3.1t (H3-4)은 주로 고환 세포에서 발현됩니다. 두 가지 모두 보존된 K79 잔기를 포함하여 높은 염기 서열 유사성을 공유합니다. 관련 참고문헌: UniProt Q16695 (조직 특이성), UniProt P68431

• 메틸화, 아세틸화, 인산화 등 히스톤 H3의 번역 후 변형(PTMs)은 크로마틴 역학을 지배하는 "히스톤 코드"를 구성합니다. 리신 79 (K79)는 메틸화(모노-, 다이-, 트리메틸화)의 주요 부위이며, 다이메틸화(H3K79me2)는 전사 조절, DNA 복구 및 텔로미어 침묵(silencing)과 관련이 있습니다. 관련 참고문헌: 관련 변형에 대해서는 PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588를 참조하십시오.

• 이 항체는 다이메틸화된 K79를 운반하는 합성 펩타이드에 대해 생성되었습니다. 서열 보존으로 인해 많은 종에 걸쳐 광범위한 반응성이 예상되며, K79에서 히스톤 H3의 다이메틸화 상태를 특이적으로 검출하도록 설계되었습니다. 관련 참고문헌: UniProt Q16695, UniProt P68431

• 세포 내 국재화: 히스톤 H3는 주로 핵과 염색체에 위치하며, 여기서 뉴클레오솜 코어의 일부를 형성합니다. 관련 참고문헌: UniProt Q16695, UniProt P68431

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원 설계: 이 항체는 사람 히스톤 H3 (NP_003520.1)의 다이메틸화된 K79를 포함하는 합성 펩타이드를 사용하여 생성되었습니다. 유사한 변형 특이적 항체의 경우 높은 특이성을 보장하기 위해 정의된 변형이 있는 합성 펩타이드 사용을 고려하십시오.
• 웨스턴 블로팅 (WB): 히스톤 H3의 예상 분자량은 약 15 kDa입니다. 최상의 결과를 위해 산 추출 히스톤이나 전세포 용해물을 사용하고, 저분자량 단백질에 대한 젤 농도와 전이 조건을 최적화하십시오. 샘플 시스템에서 검증하십시오.
• 면역조직화학 (IHC-P) 및 면역형광 (IF/ICC): 항원 회복(예: 시트르산 버퍼)이 필요할 수 있습니다. 다양한 항체 희석 배율을 테스트하십시오. 조직 고정 및 포매가 에피토프 접근성에 영향을 줄 수 있음에 유의하십시오.
• 크로마틴 면역침전 (ChIP/ChIP-seq): 이 항체는 ChIP 및 ChIP-seq 응용 분야에 적합합니다. 적절한 가교 결합(예: 포름알데히드)과 ~200–500 bp 조각으로의 크로마틴 전단(shearing)을 보장하십시오. 메틸화 상태에 대한 적절한 양성 및 음성 대조군을 포함하십시오.
• ELISA 및 IP: 표준 프로토콜을 적용할 수 있습니다. IP의 경우, 전처리(pre-clearing)와 적절한 용해 버퍼(예: 히스톤 추출을 위한 RIPA) 사용이 신호 대 잡음비를 향상시킬 수 있습니다.
• 교차 반응성: 이 항체는 사람, 쥐, 랫트 히스톤 H3를 인식하며, 염기 서열 상동성에 기반하여 추가적인 다양한 종에서의 반응이 예상됩니다. 목표 종에서 교차 반응성을 항상 확인하십시오.
• 일반 사항: 모든 다클로날 항체와 마찬가지로, 로트 간 변동성을 고려하고 로트를 교체할 때 재검증하십시오. 권장 사항에 따라 보관(아이스백으로 배송)하고 여러 번의 냉동-해동 반복을 피하십시오.

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