[KO 검증 완료] WB, ELISA용 카스파제-8 토끼 단일클론 항체 - Q14790

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: 카스파제-8의 기능과 위치

• 카스파제-8(FLICE, MACH, MCH5로도 지칭)은 시스테인-아스파르산 단백질분해효소 패밀리에 속하는 55 kDa 크기의 개시 카스파제로, 대체 스플라이싱을 통해 여러 아이소폼으로 생성됩니다. 전장 아이소폼 1은 촉매 활성을 가지며 더 짧은 아이소폼은 우성-음성 억제제로 작용할 수 있습니다.
• 외인성 세포사멸의 핵심 개시인자로서, 카스파제-8은 FAS 또는 TNFRSF1A 자극 시 어댑터 단백질 FADD를 통해 사망 수용체 복합체(DISC)에 모집되어 이합체화, 자가촉매 절단이 일어나고 하류 효과기 카스파제(CASP3/7)와 BID를 활성화시켜 세포사멸을 실행합니다. 관련 참고문헌: PMID:8681376, PMID:8681377, PMID:9184224
• 세포사멸 외에도 카스파제-8은 RIPK1을 Asp-324 위치에서 절단하여 괴사세포사멸을 음성 조절합니다. 이는 RIPK1 키나아제 활성을 억제하고 TNF 유도 괴사세포사멸 및 염증 신호 전달을 막습니다. 관련 참고문헌: PMID:31827280, PMID:31827281
• 카스파제-8은 또한 가스더민-C(GSDMC)와 가스더민-D(GSDMD)를 절단하고 활성화시켜 파이로프토시스를 매개합니다. 이 과정에서 N-말단 기공 형성 도메인이 방출되어 막 파열과 염증성 세포사멸이 유발됩니다. 관련 참고문헌: PMID:32929201, PMID:34012073
• 주로 세포질에 위치하지만 핵과 라멜리포디아에서도 발견됩니다. 단백질분해 활성과 독립적으로 Tyr-380에서 인산화되면 세포 이동이 촉진됩니다. 관련 참고문헌: PMID:18216014, PMID:27109099
• 카스파제-8은 널리 발현되며, 말초혈액 백혈구, 비장, 흉선 및 간에서 mRNA 발현 수준이 가장 높고 뇌, 고환 및 골격근에서는 매우 낮은 발현을 보입니다.
• 추가로 카스파제-8은 세포사멸 과정에서 PARP1과 PARP2를 절단하며, 그란자임 B 매개 세포독성 세포사멸 경로에 참여할 수 있습니다. 관련 참고문헌: PMID:8681376, PMID:8755496

실험 가이드 및 기술 팁

• 면역원은 인간 카스파제-8의 촉매 도메인 내 200~300번 잔기에 해당합니다. 이 영역은 전장 전효소와 큰 촉매 서브유닛에 존재하므로, 본 항체는 미처리 형태와 절단된 형태를 모두 검출할 수 있습니다.
• 웨스턴 블롯의 경우 환원 조건 하에서 SDS-PAGE를 수행하십시오. 약 55 kDa 위치에서 주요 밴드가 관찰되며, 세포 처리 방법에 따라 활성형 p18/p10 단편을 나타내는 더 작은 밴드가 나타날 수 있습니다. 항상 분자량 마커를 포함하여 사용하십시오.
• 본 항체는 KO 검증이 완료된 것으로 보고되었습니다. 실험 시스템에서 밴드 특이성을 확인하기 위해 카스파제-8 넉아웃 세포 용해물을 음성 대조군으로 사용하는 것을 고려하십시오.
• ELISA 적용의 경우, 최적의 코팅 항원 및 항체 농도를 설정하기 위해 체커보드 적정을 수행하십시오. 가능한 경우 알려진 표준물질로 검증하십시오.
• 카스파제-8 활성화 연구 시, 적절한 유도물질(예: 세포사멸의 경우 TNF-α + 사이클로헥시미드, 괴사세포사멸의 경우 TNF-α + zVAD + Smac 모방체)로 세포를 처리하고 절단 동역학을 모니터링하여 세포사멸 양식을 구분하십시오.
• 교차 반응성은 인간에 대해서만 보고되었습니다. 다른 종에 적용하는 경우, 면역원성 펩타이드 서열을 대상 생물의 카스파제-8 서열과 정렬하여 잠재적 반응성을 평가하십시오.

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