MonoMethyl-Histone H3-K18 (Q16695/P68431) Rabbit mAb for ChIP & CUT&Tag | WB, IHC-P, IF, ELISA

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: 히스톤 H3 기능 및 국재화

히스톤은 크로마틴의 주요 단백질 구성 요소로, DNA가 감기는 실패 역할을 합니다. 히스톤 H3는 H2A, H2B 및 H4와 함께 뉴클레오솜 코어를 형성합니다. 이러한 뉴클레오솜은 DNA를 압축하여 전사, 복제, 복구 및 염색체 안정성을 위한 DNA 접근성을 조절합니다. 히스톤 H3의 N-말단 꼬리는 메틸화, 아세틸화, 인산화 등을 포함한 수많은 번역 후 변형(PTM)을 받으며, 이는 집합적으로 "히스톤 코드"를 구성하고 크로마틴 역학과 유전자 발현을 조율합니다.

히스톤 H3의 리신 18 (K18, 전구체의 위치 19에 해당)은 모노메틸화될 수 있는 중요한 잔기입니다. 이러한 변형은 해당 부위의 다른 PTM과 함께 효과기 단백질의 결합에 영향을 미치고 크로마틴 구조를 조절합니다. K18의 아세틸화는 종종 전사 활성화와 연관되는 반면, 메틸화 상태는 문맥에 따른 효과를 가질 수 있습니다. H3K18의 모노메틸화는 유전자 발현 조절과 적절한 크로마틴 기능 유지에 관여하는 것으로 알려져 있습니다.

관련 참고문헌: PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708.

SWISS 엔트리 Q16695 (Histone H3.1t) 및 P68431 (Histone H3.1)은 두 가지 사람 히스톤 H3 변이체를 나타냅니다. Q16695는 주로 고환 세포에서 발현되며, 정자 형성 동안 정형적인 H3.1을 대체합니다. P68431은 체세포에서 발현되는 복제 의존적 히스톤이며 널리 분포되어 있습니다. 두 변이체 모두 핵과 염색체에 국재화합니다.

관련 참고문헌: UniProt Q16695, UniProt P68431.

실험 가이드 및 기술적 팁

• 이 항체는 K18 주변의 합성 모노메틸화 펩타이드를 사용하여 생성되었습니다. 모노메틸화 형태에 대한 특이성을 보장하기 위해 초기 검증 단계에서 해당 비변형 또는 디-/트리-메틸화 펩타이드를 사용한 펩타이드 경쟁 분석을 수행하는 것이 좋습니다.
• 웨스턴 블롯(WB)의 경우 사람, 마우스 또는 쥐 세포의 히스톤 추출물을 시작 재료로 사용하는 것이 좋습니다. 약 15 kDa 부근의 특정 밴드가 예상됩니다. 로딩이 균등한지 확인하기 위해 총 H3 항체를 포함한 적절한 대조군을 함께 실행하십시오.
• 크로마틴 면역침전(ChIP) 및 CUT&Tag 실험에서는 항체의 적정(titration)이 중요합니다. 가능한 경우 H3K18 모노메틸화가 존재하는 것으로 알려진 양성 대조군 게놈 영역과 음성 대조군 부위를 포함하는 것이 좋습니다. 가교 결합 조건은 에피토프 접근성에 영향을 미칠 수 있으므로 네이티브(Native) 및 가교 결합 ChIP 프로토콜을 모두 고려하십시오.
• 면역조직화학(IHC-P) 및 면역형광(IF/ICC)의 경우 항원 회복 조건을 최적화해야 할 수 있습니다. 염색 특이성을 확립하기 위해 문서화된 H3K18me1 수준을 가진 조직 또는 세포 샘플을 사용하는 것이 좋습니다.
• ELISA 및 도트 블롯(DB) 애플리케이션은 다양한 메틸 상태 펩타이드에 대한 항체 역가 및 특이성을 빠르게 확인하는 데 사용할 수 있습니다.

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