MonoMethyl-Histone H4-K5 Rabbit pAb (P62805) for IF/ICC and ELISA

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: 히스톤 H4 기능 및 위치

• 기능: 히스톤 H4는 뉴클레오솜의 핵심 구성 요소로, DNA를 염색질로 감싸고 압축합니다. 이는 DNA 접근성을 제한하며 전사 조절, DNA 수리, DNA 복제 및 염색체 안정성에서 중심적인 역할을 합니다. 뉴클레오솜은 히스톤 H2A, H2B, H3 및 H4 각각 두 개의 복사본으로 구성되며, 147 염기쌍의 DNA가 감싸는 팔량체를 형성합니다. 번역 후 변형에 의해 매개되는 히스톤 코드는 DNA 접근성과 뉴클레오솜 재구성을 조절합니다. 관련 참고문헌: UniProtKB P62805

• 세포내 위치: 히스톤 H4는 주로 핵에 위치하며 염색체와 결합합니다. 아세틸화는 그 하위 핵 분포에 영향을 미칠 수 있습니다. 예를 들어, 아세틸화된 H4는 정자형성 단계 11의 정자 세포에서 핵에 위치합니다. 관련 참고문헌: UniProtKB P62805

• 번역 후 변형: 히스톤 H4는 특히 N-말단 꼬리에서 광범위한 번역 후 변형을 겪습니다. 아세틸화는 여러 라이신에서 발생합니다(예: K6, K9, K13, K17, K32, K92; PMID:19608861 참조). 메틸화는 아르기닌 4에서(PRMT1에 의한 비대칭 디메틸화; PMID:11387442) 및 라이신 21에서(모노메틸화; PMID:12086618) 발견됩니다. 라이신 5에서의 모노메틸화(K5me1)는 다양한 판독 단백질에 의해 인식되고 전사 조절에 관여하는 특정 후성유전학적 표지입니다. 기타 변형으로는 인산화, 시트룰린화 및 유비쿼틴화가 있으며, 이들은 복잡한 조절 코드를 형성합니다. 관련 참고문헌: PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

실험 지침 및 기술 팁

• 면역원 설계: 이 항체는 인간 히스톤 H4의 K5에서 모노메틸화된 N-말단 영역에 해당하는 합성 펩타이드에 대해 제작되었습니다. 유사한 항체를 설계할 때, 펩타이드의 순도가 높고 변형이 질량 분석으로 확인되었는지 확인하십시오. 특이성을 검증하기 위해 분석에서 비메틸화 펩타이드를 음성 대조군으로 사용하는 것을 고려하십시오.
• IF/ICC: 면역형광의 경우, 4% 파라포름알데히드로 표준 고정 및 0.1-0.5% Triton X-100으로 투과화가 일반적으로 적합합니다. 비특이적 결합은 5% BSA 또는 혈청으로 차단하십시오. 에피토프 접근성은 다양할 수 있으므로, 항원 검색 최적화를 고려할 수 있습니다. 히스톤 단백질은 핵에 있으므로 핵 염색을 예상하십시오. 배경을 평가하기 위해 일차 항체를 사용하지 않는 대조군을 포함시키십시오.
• ELISA: 코팅을 위해 항체 또는 항원을 탄산염/중탄산염 완충액(pH 9.6)에 희석하십시오. 최적의 신호 대 잡음 비율을 결정하기 위해 항체 농도를 적정하십시오. 특이성을 확인하기 위해 양성 대조군으로 모노메틸화 펩타이드를, 음성 대조군으로 변형되지 않은 펩타이드를 사용하십시오.
• 일반: 변형 특이적 항체의 경우, 로트 간 변동이 발생할 수 있으므로, 새로운 로트를 특정 실험 시스템에서 검증하십시오. 교차 반응성은 서열 보존에 기반하여 인간, 마우스 및 래트에 대해 예측됩니다; 관심 종에서 테스트하십시오.

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