MonoMethyl-Histone H4-R3 Rabbit Polyclonal Antibody | P62805 | WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: 히스톤 H4 기능 및 국재화

히스톤 H4는 뉴클레오솜의 핵심 구성 요소로, 약 147개의 염기쌍으로 된 게놈 DNA가 이를 중심으로 감겨 있습니다. 히스톤 옥타머의 일부로서, 전사 조절, DNA 복제, 복구 및 염색체 안정성에 필수적인 역할을 합니다. 히스톤의 역동적인 번역 후 변화는 통칭 "히스톤 코드(histone code)"라고 불리며, 크로마틴 구조와 유전자 발현을 조절합니다. 관련 문헌: UniProt P62805

히스톤 H4는 주로 핵에 존재하며 세포 주기 내내 염색체와 결합합니다. 아세틸화된 H4는 11단계 정자 세포의 핵에서 특이적으로 관찰되었으며, 이는 정자 형성 과정 동안 크로마틴 응축 역할을 나타냅니다. 관련 문헌: UniProt P62805

히스톤 H4의 N-말단 꼬리는 아세틸화, 메틸화, 인산화, 시트룰린화 및 다양한 아실화를 포함한 광범위한 번역 후 변화의 대상입니다. 아르기닌 3(R3; 개시 메티오닌 제거 후 가공된 단백질에서 R4에 해당)은 단일 메틸화되거나, 비대칭적 이중 메틸화(PRMT1에 의해), 대칭적 이중 메틸화(PRMT5/PRMT7에 의해), 또는 시트룰린으로 전환될 수 있는 중요한 잔기입니다. 본 항체는 아르기닌 3에서 단일 메틸화된 형태의 히스톤 H4를 특이적으로 인식합니다. 관련 문헌: PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777, PMID:16567635

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원 설계: 이 항체는 사람 히스톤 H4 (NP_003529.1)의 아르기닌 3에 해당하는 합성 단일 메틸화 펩타이드를 사용하여 생성되었습니다. 특이성을 평가할 때, 단일 메틸화와 비변형 또는 이중 메틸화 아르기닌 3에 대한 선택적 인식을 확인하기 위해 펩타이드 경쟁 분석 또는 다르게 변형된 펩타이드를 이용한 도트 블롯을 고려하십시오.
• 웨스턴 블롯 (WB): 히스톤 H4의 예상 분자량은 약 11 kDa입니다. 최적의 분해능을 위해 고농도 SDS-PAGE 젤(15% 또는 구배 젤)을 권장합니다. 핵 추출물 또는 산 추출 히스톤이 일반적으로 더 강한 신호를 제공합니다. 크기가 작기 때문에 이동 효율을 확인하고 적절한 막(예: PVDF 0.2 µm)을 사용하십시오.
• 면역조직화학 (IHC-P) 및 면역세포화학/면역형광 (IF/ICC): 주로 핵 염색 패턴이 예상됩니다. 파라핀 포함 조각의 경우 항원 회복(예: 시트르산 버퍼, pH 6.0)을, 세포의 경우 세제 투과 처리를 최적화해야 합니다. 이 항체는 마우스 및 쥐 조직에 대한 교차 반응성이 있어 다양한 모델 시스템에서 히스톤 변화를 연구하는 데 적합합니다.
• ELISA: 단일 메틸화 펩타이드는 항체의 결합 친화도와 특이성을 정량화하기 위해 직접 또는 경쟁 ELISA의 코팅 항원으로 사용할 수 있습니다. 희석 배율은 분석 형식에 따라 적정해야 합니다.
• 종 교차 반응성: 이 항체는 사람, 마우스 및 쥐 히스톤 H4를 인식하는 것으로 보고되었으며, 히스톤 H4 서열의 극도로 보존된 특성으로 인해 광범위한 다른 종에서도 반응할 것으로 예상됩니다. 테스트되지 않은 종의 경우 면역원 영역에서의 펩타이드 서열 상동성을 확인하십시오.
• 폴리클로날 항체 고려사항: 토끼 폴리클로날 항체이므로, 로트별로 역가 및 배경의 변동이 발생할 수 있습니다. 적절한 양성 및 음성 대조군을 포함하고, 실험 조건하에서 각 새로운 로트를 재검증하십시오.

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