세포내 유세포측정용 PE 토끼 항인간/생쥐 인-Zap70-Y319+Syk-Y352 단클론 항체 - P43403

주요 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: ZAP70의 기능과 위치

• ZAP70은 적응 면역에 필수적인 70kDa 티로신 키나아제로, 활성화 시 어댑터 단백질인 LAT와 LCP2를 인산화시켜 T세포 수용체(TCR) 신호전달에서 중심 역할을 수행합니다.
• TCR이 항원과 결합한 후 ZAP70은 원형질막에 있는 CD3E와 CD247/CD3Z의 인산화된 ITAM 모티프로 모집되며, 이 과정을 통해 자가억제가 완화되고 LCK 매개 인산화가 필요합니다 (PubMed:7509083).
  관련 참고문헌: PMID:7509083
• ZAP70은 세포골격 재구성, 접착 및 이동성을 조절하여 T세포 활성화 동역학을 추가로 조절하고, 항원제시세포에 효과 기능이 적절하게 전달되도록 보장합니다.
• 또한 유비퀴틴 리가아제 CBL 및 어댑터 SLA/SLA2와 상호작용하여 CD247/CD3Z의 내재화와 분해를 매개함으로써 TCR 하향조절에 관여하며, 이를 통해 신호 종료를 조절합니다.
• ZAP70은 T세포, 자연살해세포, 초기 흉선세포 및 전구/pre B세포에서 발현되며 T세포와 B세포의 발달 및 활성화에 기여합니다.
• 이 단백질은 인산화된 ITAM에 특이적으로 결합하는 2개의 SH2 도메인과 ATP 결합 키나아제 도메인을 포함하며, UniProt 키워드 "인단백질", "Ubl 접합", "이소펩타이드 결합", "아세틸화"에서 강조된 바와 같이 인산화, 아세틸화, 유비퀴틴화를 포함한 번역 후 변형을 받습니다.
• 대체 스플라이싱을 통해 ZAP70의 여러 아이소폼이 생성되며, 질환 관련 변이는 TCR 신호전달 손상으로 인해 중증복합면역결핍증(SCID)과 연관되어 있습니다.
• 면역원 부위(Y319)는 도메인간 B 영역에 있는 주요 조절 인산화 부위로 인간과 생쥐 전반에서 고도로 보존되어 있으며, 이 부위의 인산화는 ZAP70 활성화에 필수적입니다. 활성화 루프의 서열 상동성 때문에 이 항체는 유사한 위치인 Syk Y352와도 교차 반응할 수 있습니다.

실험 가이드 및 기술 팁

• 이 항체는 인 특이적 특성을 가지므로, 샘플 처리 과정에서 인산화 수준을 유지하기 위해 모든 용해, 고정 및 염색 완충액에 포스파타아제 저해제를 첨가해야 합니다.
• 자극된 세포와 자극되지 않은 세포의 신호를 비교하거나 염색 전에 람다 포스파타아제로 샘플을 처리하여 항체 특이성을 검증하세요.
• 이 항체는 세포내 유세포측정(FC intra)에서 유효성이 검증되었습니다. 최상의 결과를 위해 최적화된 고정 및 투과화 프로토콜(예: 메탄올 또는 사포닌 기반 투과화 사용)을 적용하세요.
• T세포 신호전달 연구의 경우, 항CD3/CD28로 자극된 Jurkat 세포나 일차 인간 PBMC와 같은 알려진 양성 대조군을 사용하는 것을 고려하고, 교차 반응성을 평가하는 경우 휴지기 T세포나 Syk 결핍 B세포를 음성 대조군으로 사용하세요.

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