Phospho-eIF4EBP1 (S65) Rabbit Monoclonal Antibody for WB, ELISA - Q13541

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: eIF4EBP1 기능 및 위치

• eIF4EBP1 (진핵생물 번역 개시 인자 4E-결합 단백질 1), PHAS-I로도 알려져 있으며, 진핵생물 개시 인자 4E (eIF4E)에 결합함으로써 캡 의존적 번역 개시의 주요 억제제로 기능합니다.
• 저인산화 상태에서 eIF4EBP1은 eIF4G (eIF4G1 및 eIF4G3)와 eIF4E 결합을 경쟁하여 eIF4F 복합체의 조립을 방지하고 번역 개시를 억제합니다.
• eIF4EBP1의 고인산화는 종종 mTORC1 경로에 의해 매개되며, eIF4E로부터의 해리를 유도하여 eIF4F 복합체 형성과 번역 활성화를 허용합니다.
• eIF4EBP1은 MAP 키나제 및 mTOR 신호 전달 경로를 통해 호르몬, 성장 인자 및 영양분의 신호를 통합하여 단백질 합성과 세포 성장을 조절합니다.
• 이는 Ser65를 포함한 여러 인산화 부위를 가진 인산 단백질로, eIF4E에 대한 친화도와 번역 조절 능력을 변조합니다.
• 세포 내 소기관 수준에서, eIF4EBP1은 세포질과 핵 모두에 위치하며, 이는 번역 조절 및 가능한 핵-세포질 왕래에서의 역할과 일치합니다.
• 이 단백질은 인산화 외에도 아세틸화 및 유비퀴틴 유사 접합(Ubl)에 의해 번역 후 변환되며, 복잡한 조절 메커니즘을 강조합니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 이 항체는 특정 인산화 부위(Ser65)를 표적으로 하므로, 람다 포스파타제로 세포 용해물을 처리하거나 야생형 대 인산화 결손 돌연변이체의 신호를 비교하여 검출 특이성을 확인하십시오.
• 웨스턴 블롯의 경우 표준 절차를 사용하되, 인산화 상태를 보존하기 위해 용해 완충액에 포스파타제 억제제가 포함되어 있는지 확인하십시오. BSA와 같은 차단제는 인산화 특이적 항체의 전형적인 비특이적 결합을 줄이는 데 도움이 될 수 있습니다.
• ELISA에서는 면역원 펩타이드를 코팅하여 양성 대조군으로 사용하고, 인산화 특이성을 검증하기 위해 비인산화 펩타이드를 포함시키는 것을 고려하십시오.
• mTORC1의 활성화(예: 인슐린 또는 혈청 자극에 의한)는 Ser65 인산화를 증가시키는 반면, 억제(예: 라파마이신)는 이를 감소시킵니다. 실험에 적절한 자극 또는 억제 대조군을 포함시키십시오.

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