WB, ELISA용 Phospho-NF-κB p105-S932 Rabbit mAb - P19838

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: NF-κB p105 기능 및 국소화

• NFKB1은 p105 전구체 단백질을 암호화하며, 이는 단백질 분해적으로 처리되어 NF-κB 전사 인자 복합체의 활성 p50 소단위체를 생성합니다 (PubMed:1423592). 관련 참고문헌: PMID:1423592
• p50 소단위체는 RELA/p65와 결합하여 가장 풍부한 NF-κB 복합체인 p65-p50 이량체를 형성하며, 이는 표적 유전자 프로모터의 κB 부위 (5'-GGRNNYYCC-3')에 결합하여 전사를 활성화합니다 (PubMed:1740106, PubMed:7830764). 관련 참고문헌: PMID:1740106, PMID:7830764
• NF-κB는 면역 반응, 염증, 세포 사멸(apoptosis), 및 세포 증식의 중심이 되는 다기능 전사 인자로, IκB 억제 단백질과 다양한 자극에 의해 조절됩니다.
• p105 단백질은 N-말단 Rel 상동성 도메인(RHD)과 C-말단 앤키린 반복(ankyrin repeats)을 포함하며, NF-κB 이량체에 대한 세포질 보유 인자로 작용하여 비활성 상태로 가둡니다.
• 활성화 신호가 있으면 IκB 키나제(IKKs)가 IκB를 인산화하여 분해를 유도하고 NF-κB 이량체를 방출시키며, 방출된 이량체는 핵으로 이동하여 유전자 발현을 조절합니다.
• p50 동량체(homodimers)는 BCL3과 결합하지 않는 한 전사 억제제로 작용하며, 이는 NF-κB의 이량체 특이적 조절 다양성을 강조합니다.
• 인산화, 아세틸화, 유비퀴틴화, 및 S-니트로실화를 포함한 번역 후 수정은 NF-κB 활성도를 정교하게 조절하며, 세린 잔위(예: S932)의 인산화는 p105 처리 및 활성화와 관련이 있습니다.
• 세포 내 국소화는 p105의 경우 주로 세포질이며, 활성 p50을 포함하는 이량체는 세포질과 핵 사이를 오갑니다.

실험 가이드 및 기술적 팁

• 면역원은 사람 NF-κB p105의 Ser932 주변 잔기에 해당하는 합성 인산화 펩타이드입니다. Western blot의 경우 약 105 kDa (p105)의 주요 밴드와 약 50 kDa (p50)의 밴드가 예상됩니다. 인산화 특이성은 포스파타제 처리로 용해물을 처리하거나 인산화 비특이 항체와 비교하여 검증하십시오.
• ELISA 응용의 경우, 인산화 펩타이드 또는 자극된 세포 용해물을 사용하여 항체 농도를 적정(titer)하고 최적화하십시오. 비특이적 결합을 줄이기 위해 적절한 차단(blocking) 단계를 포함하십시오.
• 항체가 쥐와 랫트와 교차 반응하므로, 양성 대조군으로 관련 세포주(예: Jurkat, HeLa, RAW 264.7)를 사용하는 것이 좋습니다. TNF-α, LPS 또는 PMA/이오노마이신으로 NF-κB 신호 전달을 유도하면 검출을 향상시킬 수 있습니다.
• NF-κB 패밀리 구성원들이 유사성을 공유하므로, 특이성을 확인하기 위해 항상 분자량 마커와 적절한 대조군을 포함하십시오.

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