Phospho-POLR2A CTD-T4 Rabbit Polyclonal Antibody for WB, IP, ELISA, ChIP - P24928

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: POLR2A 기능 및 위치

• POLR2A는 RNA 중합효소 II(Pol II)의 가장 큰 소단위를 암호화하며, DNA 의존적 RNA 합성의 촉매 중심 역할을 하는 ~217 kDa 단백질로, mRNA 및 비코딩 RNA 생산에 필수적입니다. 관련 참고문헌: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• POLR2A의 C-말단 도메인(CTD)은 52개의 연속된 heptapeptide 반복(YSPTSPS)으로 구성되며, 주로 Ser2와 Ser5에서 역동적인 인산화를 거쳐 전사 개시, 신장, 종결 및 공동 전사적 RNA 가공을 조절합니다. 관련 참고문헌: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A는 뉴클레오타이드 추가에 필수적인 Mg2+ 이온을 배위하는 DxDGD 모티프를 포함하며, 높은 전사 충실도를 보장하기 위한 교정용 3'-5' 엑소뉴클레아제 활성도 보유합니다. 관련 참고문헌: PMID:8381534, PMID:9852112
• 주로 핵과 염색체에 위치하지만, POLR2A는 세포질에서도 검출되어 그 역동적인 셔틀링과 다면적인 역할을 반영합니다.
• 세린/트레오닌 인산화, 라이신 아세틸화, 메틸화 및 유비퀴틴화를 포함한 번역 후 변형은 Pol II의 활성과 안정성을 조절합니다.
• 대체 스플라이싱은 여러 이소형을 생성하며, POLR2A의 돌연변이는 신경발달 장애와 관련되어 그 임상적 중요성을 강조합니다.
• 또한 RNA 의존적 RNA 중합효소로 작용하여 비코딩 RNA를 연장하고, 감염 시 B형 간염 델타 바이러스의 레플리케이스 역할도 합니다.

실험 지침 및 기술 팁

• 면역원이 POLR2A CTD 반복의 T4에 해당하는 인산화 특이적 펩타이드이므로, 비인산화 펩타이드 경쟁 실험이나 포스파타제 처리 세포 용해물을 사용하여 항체의 인산화 의존적 특이성을 확인하십시오.
• 웨스턴 블롯(WB)의 경우, 큰 단백질 크기(~217 kDa)로 인해 낮은 비율의 SDS-PAGE 겔(예: 6-8%)과 연장된 전사 시간을 사용하여 전체 길이 POLR2A의 효율적인 전사를 보장하십시오.
• ChIP 응용은 가교 및 염색질 분쇄 조건 최적화가 필요할 수 있습니다; 다양한 분쇄 방법(예: 초음파 처리 또는 효소적 분해)을 테스트하여 200–500 bp 크기의 염색질 단편을 얻으십시오.
• 면역침강(IP) 및 ELISA 실험에서는 적절한 양성 및 음성 대조군(예: 알려진 POLR2A 발현 세포주(HeLa, HEK293)의 용해물 및 가능한 경우 인산화 결손 돌연변이체)을 포함하십시오.

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