인산화-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 토끼 다클론 항체 (WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA용) - Q15796 / P84022

핵심 제품 사양 및 매개변수

생물학적 배경: SMAD2와 SMAD3의 기능 및 위치화

• SMAD2는 수용체 조절 SMAD (R-SMAD)로, TGF-베타 및 액티빈 경로의 세포 내 신호 변환기로 작용합니다.
• 리간드 결합 시 1형 수용체 키나아제가 C말단 SSXS 모티프(Ser465 및 Ser467)에서 SMAD2를 인산화시켜 활성화를 유발하고, SMAD4와 복합체를 형성한 후 핵으로 이동합니다.
• 핵 내에서 SMAD2/SMAD4 복합체는 표적 유전자 프로모터의 TGF-베타 반응 요소(TRE)에 결합하여 전사를 조절합니다.
• SMAD2는 대장직장암에서 종양 억제인자로 기능할 수 있습니다. 관련 참고문헌: PMID:8752209
• 골격근, 내피세포, 심장, 태반에서 높게 발현됩니다.
• SMAD3는 SMAD2의 가까운 상동체로 유사한 활성화 기전을 공유합니다. 본 항체는 SMAD3의 해당 부위 Ser423/425의 인산화를 검출합니다.
• 주요 번역 후 변형으로는 인산화, 아세틸화, 유비퀴틴화가 포함되며 SMAD2에는 아연 결합 부위도 포함되어 있습니다.

실험 가이드 및 기술 팁

• 면역원은 이중 인산화 모티프를 표적으로 하는 합성 인산 펩타이드로, 활성화된 형태의 SMAD2와 SMAD3에 대한 특이성을 제공합니다. 인산 특이성은 포스파타아제 처리된 샘플을 사용하여 검증하십시오.
• 웨스턴 블롯의 경우, 용해 과정에서 인산화를 보존하기 위해 포스파타아제 저해제를 첨가하고 신선한 샘플을 사용하는 것을 권장합니다. SMAD2와 SMAD3의 예상 분자량은 약 48-52 kDa이지만, 인산화 및 동형 단백질로 인해 여러 밴드가 나타날 수 있습니다.
• 면역형광 및 면역조직화학의 경우 4% PFA를 이용한 표준 고정과 Triton X-100을 이용한 투과화가 적합할 수 있으며, IHC-P의 경우 항원 회수 조건을 최적화하십시오.
• ELISA는 TGF-베타 경로 활성화의 고처리량 스크리닝에 사용할 수 있으며, 다종 연구의 경우 교차 반응성 검사를 권장합니다.
• 항상 적절한 양성 및 음성 대조군(예: TGF-베타 처리 세포 vs 무처리 세포)을 포함하여 인산 특이성을 확인하십시오.

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