Symmetric DiMethyl-Histone H3-R8 Rabbit pAb (Q16695/P68431) for WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP-seq

핵심 제품 사양 및 파라미터

생물학적 배경: Histone H3.1t / Histone H3.1 기능 및 위치

히스톤 H3 변이체(H3-4/HIST3H3에 의해 암호화되는 H3.1t 및 H3C1-H3C12와 같은 다중 유전자 클러스터에 의해 암호화되는 H3.1 포함)는 뉴클레오솜의 핵심 구성 요소입니다. 뉴클레오솜은 DNA를 염색질로 감싸고 압축하여 DNA 접근성을 제한하며, 전사 조절, DNA 수리, DNA 복제 및 염색체 안정성에서 중심적인 역할을 합니다.

관련 참고문헌: UniProt P68431

• 이 히스톤들은 히스톤 코드라고 총칭되는 복잡한 번역 후 변형(PTM)을 받으며, 이는 염색질 역학과 유전자 발현을 조절합니다. 이 중 성숙한 히스톤 H3의 8번 위치 아르기닌(R8, UniProt 서열에서 Arg9에 해당)의 대칭 이메틸화는 단백질 아르기닌 메틸전달효소 5(PRMT5)에 의해 촉매됩니다. 이 변형은 전사 억제 및 이질염색질 형성과 연관되어 있습니다.

관련 참고문헌: UniProt Q16695

• 히스톤 H3.1t (UniProt Q16695)는 주로 정세포에서 발현되는 고환 특이적 변이체인 반면, H3.1 (UniProt P68431)은 정형 체세포 형태를 나타냅니다.
• 세포내 위치: 두 변이체 모두 핵과 염색체에 위치합니다.

실험 지도 및 기술 팁

• 웨스턴 블롯 (WB): 약 15 kDa에서 밴드가 관찰될 것으로 예상됩니다. 대칭 이메틸화 특이성을 확인하기 위해 적절한 양성 및 음성 대조군(예: 처리되지 않은 세포 대 PRMT5 억제제 처리 세포)을 사용하십시오. R8me2s 에피토프에 대한 항체 결합을 검증하기 위해 펩타이드 경쟁 분석을 고려하십시오.
• 면역조직화학 (IHC-P) 및 면역형광 (IF/ICC): 에피토프 접근성이 다를 수 있으므로 고정 및 투과화 단계를 최적화하십시오. 히스톤 H3는 핵 내에 있으므로, 핵 염색 패턴을 확인하고 전체 히스톤 H3 또는 DAPI 대조 염색과 비교하십시오.
• ELISA: 이 항체는 대칭 이메틸화 수준을 정량화하기 위한 직접 또는 간접 ELISA에 사용할 수 있습니다. 항체 농도를 적정하고 적절한 차단제를 포함시키십시오.
• ChIP-seq: 히스톤 H3의 높은 풍부도로 인해 가교 및 염색질 분쇄를 최적화하십시오. 최소한의 입력 물질을 사용하고 양성 및 음성 유전자좌(예: 이질염색질 대 진염색질 영역)로 ChIP 효율을 검증하십시오.
• 일반 팁: 변형 특이적 신호를 구별하기 위해 항상 비변형 펩타이드 대조군을 포함시키십시오.

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